T/CVMA 229-2025 兔胚胎移植技术操作规程

​​《兔胚胎移植技术操作规程》（T/CVMA 229-2025）主要内容总结​​

​​1. 文件概述​​

• ​​标准编号​​：T/CVMA 229-2025
• ​​名称​​：兔胚胎移植技术操作规程（Operation procedures of rabbit embryo transfer technology）
• ​​归口单位​​：中国兽医协会
• ​​起草单位​​：广东省医学实验动物中心、五邑大学等。
• ​​适用范围​​：规范兔胚胎移植的全流程技术，包括供/受体兔选择、超数排卵、冲胚、检胚、移植等，适用于稀有兔种和基因工程兔的保存。

​​2. 规范性引用文件​​

引用多项国家标准和行业标准，涵盖实验动物质量、饲料、环境、兽医防疫等，例如：

• ​​GB 14922/14923​​：实验动物微生物和遗传质量控制
• ​​GB 14925​​：实验动物环境及设施
• ​​NY/T 5133​​：无公害肉兔饲养管理
• ​​GB/T 39760-2021​​：实验动物安乐死指南

​​3. 术语与定义​​

• ​​兔胚胎移植​​：将供体兔胚胎移植至受体兔的代繁育技术。
• ​​超数排卵​​：通过激素（如PMSG、FSH）刺激供体兔增加排卵数量。
• ​​供体兔​​：提供胚胎的健康母兔（≥4月龄）。
• ​​受体兔​​：接受胚胎的经产母兔（需母性良好）。
• ​​检胚​​：对胚胎质量进行形态学鉴定、分级和清洗的过程。

​​4. 缩略语​​

• ​​FSH​​（卵泡刺激素）、​​GnRH​​（促性腺激素释放激素）、​​HCG​​（人绒毛膜促性腺激素）、​​PMSG​​（孕马血清促性腺激素）。

​​5. 试剂、设备与材料​​

• ​​试剂​​：PMSG、HCG、FSH、199培养基、冲胚液（含牛血清白蛋白、抗生素等，配方见附录A）。
• ​​设备​​：恒温热台、体视显微镜、CO₂培养箱、手术器械、胚胎移植管等（清单见附录B）。

​​6. 胚胎移植程序​​

提供两种超数排卵方案：

• ​​PMSG方案​​：
  • 第1天下午：皮下注射PMSG 150 IU
  • 第4天下午：配种+静脉注射HCG 150 IU（受体兔同期注射HCG或GnRH）
  • 第5天上午：冲胚、移植。
• ​​FSH方案​​：
  • 每12小时肌肉注射FSH 50 IU（共6次），第4天下午配种+HCG，第5天上午移植。

​​7. 供体兔管理​​

• ​​选择标准​​：健康、性成熟（≥4月龄），符合遗传和微生物质量控制（GB 14922/14923）。
• ​​饲养要求​​：饲料（GB 14924系列）、饮水（NY 5027）、环境（GB 14925）。
• ​​超排处理​​：发情间期注射PMSG或FSH，72小时后配种+HCG。

​​8. 受体兔管理​​

• ​​选择标准​​：同供体兔，优先选用经产母兔。
• ​​同期发情​​：发情期（外阴深红色）注射HCG 100 IU或GnRH 15μg。

​​9. 冲胚操作​​

• ​​时间​​：超排后70-72小时（配种后20-25小时，胚胎为1-4细胞期）。
• ​​方法​​：手术法或安乐死后分离输卵管，用冲胚液从输卵管伞部冲出胚胎。
• ​​环境要求​​：无菌手术室（25℃），器械高压灭菌，冲胚液预热至38.5℃。

​​10. 检胚与鉴定​​

• ​​步骤​​：胚胎在38.5℃操作液中清洗3-5次，显微镜下观察形态和细胞数。
• ​​淘汰标准​​：未受精卵（无极体或原核）、异常发育胚胎不得移植。

​​11. 胚胎移植手术​​

• ​​麻醉​​：盐酸赛拉嗪+异氟烷维持。
• ​​手术步骤​​：
  1. 下腹侧切口（2-3 cm），暴露输卵管。
  2. 用移植管将胚胎植入输卵管第2-3个弯曲处（每侧4-10枚，显微注射胚胎可增至30枚）。
  3. 缝合后抗生素预防感染，术后13天通过B超确认妊娠。

​​12. 附录​​

• ​​附录A​​：冲胚液和胚胎操作液的详细配方（含BSA、氨基酸、抗生素等）。
• ​​附录B​​：必备设备清单（如显微镜、培养箱、手术器械等）。

​​13. 其他要求​​

• ​​生物安全​​：操作需符合无公害标准（NY 5131、GB 18596）。
• ​​福利伦理​​：麻醉和安乐死遵循GB/T 39760-2021。

​​总结​​：该标准系统规范了兔胚胎移植的技术流程，从供受体兔选择、激素处理、手术操作到术后管理，确保实验的科学性和动物福利，适用于科研与保种应用。

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