NY/T 565-2025 梅迪-维斯纳病诊断技术

梅迪-维斯纳病诊断技术标准（NY/T 565-2025）主要内容总结

​​一、标准更新要点​​

• ​​替代旧版​​：取代NY/T 565-2002，新增临床症状、病理变化、病原学检测（PCR/qPCR）、间接ELISA方法、综合判定和鉴别诊断。
• ​​技术升级​​：
  • 引入分子生物学检测（PCR/qPCR）提高敏感性和特异性。
  • 新增间接ELISA替代传统琼脂扩散试验（AGID），提升血清学检测效率。
  • 强调病毒分离与核酸检测结合的确诊流程。

​​二、疾病概述​​

• ​​病原​​：梅迪-维斯纳病毒（MVV），属慢病毒属，与山羊关节炎脑炎病毒（CAEV）存在交叉反应。
• ​​宿主​​：主要感染绵羊，山羊亦可感染但症状不同。
• ​​临床表现​​：
  • ​​梅迪病（呼吸型）​​：渐进性呼吸困难、消瘦，肺间质增生。
  • ​​维斯纳病（脑炎型）​​：后肢麻痹、中枢神经脱髓鞘病变。

​​三、诊断技术体系​​

​​1. 临床症状与病理学检查​​

• ​​梅迪病​​：
  • 剖检：肺肿大2-4倍，灰黄色海绵状，淋巴结肿大。
  • 组织学：肺泡壁增厚，淋巴细胞浸润，淋巴滤泡增生。
• ​​维斯纳病​​：
  • 剖检：肌肉萎缩（慢性病例）。
  • 组织学：脑脊髓血管周围淋巴细胞浸润（"套袖现象"），脱髓鞘。

​​2. 病原学检测​​

• ​​病毒分离​​（规范性）：

  • ​​样本​​：抗凝血、乳汁、肺/脑/脊髓组织。
  • ​​步骤​​：
    1. 白细胞分离（密度梯度离心）或组织块培养。
    2. 与绵羊脉络丛成纤维细胞共培养2-5周。
    3. ​​CPE判断​​：细胞空泡化、合胞体形成。
  • ​​结果​​：CPE阳性需PCR/qPCR验证。

• ​​PCR检测​​：

  • ​​靶基因​​：gag基因（515bp）。
  • ​​引物​​：Gag-F/Gag-R（附录D）。
  • ​​判定​​：电泳显示515bp条带为阳性，测序确认。

• ​​qPCR检测​​：

  • ​​探针​​：TaqMan或SYBR Green法（148bp）。
  • ​​阈值​​：Ct≤35阳性，Ct>38阴性，35<Ct≤38复检。
  • ​​熔解曲线​​：单一峰验证特异性。

​​3. 血清学检测​​

• ​​琼脂扩散试验（AGID）​​：

  • ​​抗原​​：MVV标准抗原。
  • ​​结果​​：抗原孔与待检血清间沉淀线联锁为阳性。

• ​​间接ELISA​​：

  • ​​包被抗原​​：重组MVV p25蛋白。
  • ​​判定​​：
    • S值（吸光值百分比）>40%阳性，<30%阴性，30-40%复检。
    • 计算公式：S=OD450−PC​−OD450−NC​OD450−S​−OD450−NC​​×100%

​​四、综合判定与报告​​

1. ​​疑似病例​​：临床症状/病理变化符合，或病毒分离阳性。
2. ​​确诊病例​​：核酸检测（PCR/qPCR）阳性，或血清学（AGID/ELISA）阳性。
3. ​​报告要求​​：需注明检测方法及结果判定依据。

​​五、鉴别诊断要点​​

• ​​与山羊关节炎脑炎（CAEV）区分​​：
  • ​​宿主差异​​：MVV主感绵羊，CAEV主感山羊。
  • ​​症状差异​​：
    • MVV：呼吸/神经症状，无关节炎。
    • CAEV：羔羊脑炎、成羊关节炎/乳房炎。
  • ​​确诊方法​​：核酸检测靶基因或全基因组测序。

​​六、附录关键内容​​

• ​​病毒分离​​：细胞培养液配方（含10%胎牛血清）、PBS配制（附录A）。
• ​​PCR/qPCR​​：引物序列（附录D）、TAE缓冲液配制（附录C）。
• ​​ELISA​​：包被缓冲液（碳酸盐缓冲液pH9.6）、终止液（2M H₂SO₄）配制（附录E）。

​​七、实施注意事项​​

• ​​生物安全​​：病毒分离需在二级生物安全柜操作。
• ​​质量控制​​：
  • 试验需设阴/阳性对照，空白对照（如：超纯水）。
  • 商品化试剂需验证特异性（如：排除CAEV交叉反应）。
• ​​结果存疑处理​​：复检或送权威实验室复核。

该标准构建了从临床初筛到实验室确诊的完整技术体系，整合传统病理学、现代分子生物学及血清学方法，为梅迪-维斯纳病的精准防控提供依据。

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