T/GAIA 030-2025 职业暴露人群血清中多环芳烃的测定 液相色谱法

《职业暴露人群血清中多环芳烃的测定液相色谱法》​​ 主要内容的详细总结：

1. ​标准性质与范围：​​

   • 本文件是一项由 ​广东省分析测试协会​ 提出并归口的 ​团体标准。
   • 它规定了使用 ​液相色谱法配荧光检测器​ 测定职业暴露人群血清中 ​15种特定多环芳烃（PAHs）​​ 的方法。
   • 目标化合物：萘、苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并[a]蒽、䓛、苯并[b]荧蒽、苯并[k]荧蒽、苯并[a]芘、二苯并[a,h]蒽、苯并[g,h,i]苝、茚并[1,2,3-cd]芘。
   • 应用场景：主要用于 ​内暴露水平监测​ 及 ​职业暴露人群血清​ 中这15种PAHs的检测。

2. ​规范性引用文件：​​

   • 遵循GB/T 1.1-2020的起草规则。
   • 引用GB/T 6682关于分析实验室用水规格的规定。

3. ​方法原理：​​

   • 血清样品用 ​乙腈​ 进行萃取。
   • 通过 ​​-20℃冷冻放置2小时​ 来沉淀蛋白质。
   • 在 ​4℃下以10,000 r/min离心5分钟。
   • 取 ​上清液​ 直接进样分析。
   • 使用配备 ​荧光检测器（FLD）​​ 的液相色谱仪进行分离和检测。
   • 采用 ​外标法定量​（通过绘制标准曲线计算浓度）。

4. ​试剂与材料：​​

   • ​主要溶剂：​​ 一级水（GB/T 6682）、乙腈（CH₃CN）。
   • ​标准品：​​ 要求使用包含所述15种PAHs的标准溶液（浓度1000 µg/mL），需在​-18℃避光保存。附录A提供了详细的化合物中英文名称、分子式和CAS号。
   • ​标准溶液配制：​​
     • 标准中间液（10.0 µg/mL）：用乙腈稀释1000 µg/mL母液。
     • 标准使用液（100 ng/mL）：用乙腈稀释中间液。
     • 标准系列工作液（临用现配）：用乙腈稀释使用液，得到浓度范围为 ​1.00 ng/mL, 2.50 ng/mL, 5.00 ng/mL, 10.0 ng/mL, 15.0 ng/mL, 25.0 ng/mL​ 的标准曲线点。
   • ​安全警告：​​ 强调多环芳烃具有致癌、致畸、致突变性，操作时务必在通风柜中进行并采取严格防护措施。

5. ​仪器和设备：​​

   • 液相色谱仪（配荧光检测器）。
   • 涡旋混合器（≥3000 r/min）。
   • 低温离心机（≥10000 r/min）。
   • 移液枪（10μL~100μL，100μL~1000μL）。

6. ​试样的制备与保存：​​

   • 取新鲜或解冻后混合均匀的血清样本。
   • ​取样量：​​ 最小用量 ​0.1 mL，一般用量 ​0.1 mL - 1.0 mL。实际操作中选用 ​100 μL​（见分析步骤8.1）。
   • ​保存：​​ 血清样本需在 ​​-70℃以下​ 冷冻保存，​避免反复冻融。
   • ​生物安全：​​ 强调处理血清样本需遵守生物安全规定。

7. ​分析步骤：​​

   • ​提取：​​
     • 取 ​100 μL​ 解冻血清样本于1.5 mL离心管中。
     • 加入 ​300 μL​ 乙腈。
     • 涡旋混合 ​2分钟。
     • ​​-20℃放置2小时​ 沉淀蛋白。
     • ​4℃下10000 r/min离心5分钟。
     • 取上清液用于分析。
   • ​液相色谱参考条件：​​
     • 色谱柱：PAHC₁₈柱 (250mm × 4.6mm, 5μm) 或等效柱。
     • 流动相：
       • A相：水
       • B相：乙腈
       • 梯度洗脱程序（见表1）：初始60%B，25min内升至100%B，保持到38min，40min内回到60%B，保持到50min。
     • 流速：​1.2 mL/min。
     • 柱温：​27℃​。
     • 进样量：​20 μL。
     • ​荧光检测器程序：​​ 采用时间程序切换激发波长(Ex)和发射波长(Em)以优化不同PAHs的检测（具体切换时间及波长见表2，如0min: Ex280nm/Em324nm; 9.5min: Ex254nm/Em350nm等）。
   • ​标准曲线制作：​​ 将标准系列工作液（1-25 ng/mL）进样，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。标准色谱图参见附录B。
   • ​试样测定：​​ 将处理好的上清液进样，根据保留时间定性，根据峰面积和标准曲线计算浓度。若浓度超出线性范围（>25 ng/mL），需稀释或减少取样量重新处理。
   • ​空白试验：​​ 使用相同步骤但不加血清样本进行空白试验，用于结果扣除。

8. ​结果计算和表述：​​

   • 血清中每种多环芳烃的浓度 XiX_iXi​ (ng/mL) 按下式计算：
     $X_i = /frac{C_i /times V}{V_i}$
     • CiC_iCi​：从标准曲线求得的试样提取液中PAH i的浓度 (ng/mL)。
     • VVV：加入的提取溶剂体积 (μL)，即 ​300 μL。
     • ViV_iVi​：试样溶液取样体积 (μL)，即 ​100 μL。
   • ​计算结果需扣除空白值。​​
   • 结果以两次平行测定的 ​算术平均值​ 表示，保留 ​三位有效数字。

9. ​方法性能指标：​​

   • ​灵敏度：​​
     • ​检出限(LOD)：​​
       • 苊、菲、蒽、苯并[a]蒽、䓛、苯并[b]荧蒽、苯并[k]荧蒽、苯并[a]芘、苯并[g,h,i]苝、茚并[1,2,3-cd]芘：​0.20 ng/mL。
       • 萘、芴、荧蒽、芘、二苯并[a,h]蒽：​0.30 ng/mL。
     • ​定量限(LOQ)：​​
       • 苊、菲、蒽、苯并[a]蒽、䓛、苯并[b]荧蒽、苯并[k]荧蒽、苯并[a]芘、苯并[g,h,i]苝、茚并[1,2,3-cd]芘：​0.60 ng/mL。
       • 萘、芴、荧蒽、芘、二苯并[a,h]蒽：​1.00 ng/mL。
   • ​准确度(回收率)：​​ 在 ​1.0 ng/mL ~ 25 ng/mL​ 的添加浓度范围内，所有15种PAHs的回收率要求在 ​60% ~ 120%​​ 之间。
   • ​精密度：​​ 在重复性条件下，两次独立测定结果的 ​绝对差值不得超过其算术平均值的 20%​。

10. ​起草信息：​​

    • ​起草单位：​​ 广州市疾病预防控制中心、广东省人民医院、广州市白云区疾病预防控制中心、南方医科大学。
    • ​主要起草人：​​ 谭磊、邓芬芳、安然、周思、彭荣飞、廖佳、朱海燕、黄海兰、潘加亮、李国威、朱惠扬。

11. ​附录：​​

    • ​附录A (资料性)：​​ 列出了15种目标多环芳烃的标准中英文名称、化学分子式和CAS登记号。
    • ​附录B (资料性)：​​ 提供了浓度为10.0 ng/mL的多环芳烃混合标准溶液的典型液相色谱图（带峰归属）。

​总结核心：​​ 该标准详细规定了使用乙腈萃取-冷冻沉淀蛋白-高速离心-液相色谱荧光检测法（HPLC-FLD）测定职业暴露人群血清中15种特定多环芳烃的完整流程，包括样品处理、仪器条件、标准曲线制作、定量计算及方法性能指标（检出限、定量限、回收率、精密度），为相关检测提供了标准化的操作依据和质量控制要求。