NY/T 4586-2025 苏云金芽胞杆菌农药制剂参照样品的制备和定值指南

《苏云金芽胞杆菌农药制剂参照样品制备和定值指南》主要内容总结

​1. 适用范围​

• 适用于以毒力效价或杀虫蛋白为特性值的苏云金芽胞杆菌（Bt）农药制剂参照样品的制备与定值。
• 球形芽胞杆菌产品可参照执行。

​2. 规范性引用文件​

涵盖农药包装、微生物检验、标准样品定值、溯源性评估等10项国家标准（如GB 3796、GB/T 15000系列、JJF 1343等）。

​3. 关键术语​

• ​参照样品​：定量毒力效价或杀虫蛋白、均匀稳定的Bt参考品。
• ​均匀性​：单元内/间特性值差异在限值内。
• ​稳定性​：规定储存条件下特性值保持限值内。
• ​定值​：通过特定方法确定特性值（如杀虫蛋白含量、毒力效价）。
• ​溯源性​：确保测量结果时空可比性。

​4. 参照样品分类​

• ​杀虫蛋白参照样品​：基于蛋白分子量与靶标害虫。
• ​毒力效价参照样品​：基于靶标害虫的生物活性。

​5. 制备流程​

​5.1 原料选择​

• 选用稳定、无杂质、符合GB/T 19567.1-2004标准的原粉，常温储存1年。

​5.2 生产者能力​

• 需具备原粉获取能力、毒力效价检测能力（附录A）。

​5.3 制备步骤​

1. ​水洗处理​：原粉加RO水搅拌离心，至上层液澄清。
2. ​喷雾干燥​：控制进口温度180~190℃，出口温度70~75℃，确保粒径（D50≤25μm）和干燥减量（≤6%）。
3. ​分装储存​：分装至5mL冻存管，外套铝箔袋，-20℃~-18℃储存。

​5.4 质量检测​

• 检测指标：粒径、干燥减量、霉菌数（≤100个/g）。
• 检测方法：激光粒度仪、GB/T 30361、GB 4789.15。

​5.5 均匀性与稳定性检验​

• ​均匀性​：杀虫蛋白样品需方差分析（F检验），毒力效价样品免检。
• ​稳定性​：
  • 常温（20~25℃）2个月，检测5次；
  • 低温（0~5℃）1~2年；
  • 长期（-20~-18℃）至少2年，定期抽检。

​6. 定值方法​

​6.1 杀虫蛋白定值​

• ​方法​：SDS-PAGE法结合BSA标准品（附录B）。
• ​流程​：
  1. 取样6个以上，检测蛋白含量。
  2. Dixon检验剔除异常值，数据合并后计算平均值及不确定度。

​6.2 毒力效价定值​

• ​溯源原则​：使用可追溯对照样品或首次赋值后遵循溯源性。
• ​定值方式​：
  1. 委托≥2个实验室统一检测（敏感靶标害虫、标准方法）。
  2. 数据检验（Grubbs/Dixon法）后合并分析，差异显著时复测。
• ​结果判定​：正态分布数据通过显著性检验后确定效价值及不确定度。

​7. 包装与储运​

• ​包装​：5mL冻存管+铝箔袋，符合GB 3796和GB/T 15000.6。
• ​标签与证书​：按GB/T 15000.4标注样品信息、定值、储存条件、质量保证期。
• ​储运​：阴凉干燥环境，避免破损污染。

​8. 质量保证期​

• 依据储存条件确定，长期储存（-20℃~-18℃）至少2年，定期验证稳定性。

​附录关键内容​

• ​附录A（制备）​​：
  • 设备与原料：离心机、喷雾干燥机、原粉水洗流程。
  • 分装：2g/管，-18℃储存。
• ​附录B（检测）​​：
  • ​均匀性检验​：方差分析法（F检验），判断组间差异。
  • ​稳定性检验​：斜率分析法（|b₁| < t值视为稳定）。
  • ​定值统计​：Dixon检验剔除异常值，SDS-PAGE蛋白定量。

​核心要求​

• ​生产者资质​：需具备原粉处理、毒力检测能力。
• ​数据溯源性​：定值结果需可追溯至标准方法或对照样品。
• ​质量控制​：全程监控粒径、干燥减量、微生物指标，确保均匀稳定。

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