NY/T 4642-2025 蜂王浆中嗣胶类糖化蛋白的测定 分光光度法

《蜂王浆中酮胺类糖化蛋白的测定 分光光度法》（NY/T 4642-2025）主要内容总结：

​​1. 标准概述​​

• ​​标准编号与名称​​：NY/T 4642-2025《蜂王浆中酮胺类糖化蛋白的测定 分光光度法》。
• ​​发布与实施​​：2025年1月9日发布，2025年5月1日实施。
• ​​归口单位​​：全国畜牧业标准化技术委员会（SAC/TC 274）。
• ​​起草单位​​：中国农业科学院蜜蜂研究所、江苏蜂奥生物科技有限公司等。

​​2. 适用范围​​

• ​​检测对象​​：蜂王浆中的酮胺类糖化蛋白（以1-脱氧-1-吗啉啉-D-果糖DMF计）。
• ​​检出限与定量限​​：检出限3 mg/g，定量限10 mg/g。

​​3. 术语定义​​

• ​​酮胺类糖化蛋白​​：由还原糖与蛋白质通过非酶促褐变（美拉德反应）形成的醛亚胺经Amadori重排生成的酮胺结构化合物，其结构与DMF一致。

​​4. 方法原理​​

• ​​反应机制​​：酮胺类糖化蛋白在碱性条件下还原氯化硝基四氮唑蓝（NBT），生成蓝紫色甲臜化合物，在530 nm波长处测定吸光度，与DMF标准曲线比对定量。

​​5. 试剂与材料​​

• ​​关键试剂​​：
  • 碳酸盐缓冲液（pH 10.8，0.1 mol/L）。
  • Triton X-100溶液（0.02%，pH 10.8）。
  • DMF标准储备液（6 mmol/L，需冷藏保存）。
  • NBT储备液（0.5 mmol/L，棕色瓶避光保存）。
• ​​标准系列​​：0~1.2 mmol/L的DMF梯度溶液。

​​6. 仪器设备​​

• 分光光度计（精度±2 nm）、恒温水浴锅（±1℃）、分析天平（0.01 mg精度）、涡旋混匀器。

​​7. 样品处理​​

• ​​样品制备​​：蜂王浆需解冻至25℃并搅拌均匀，称取1 g定容至200 mL。
• ​​保存要求​​：若不能立即检测，需-18℃冷冻保存。

​​8. 试验步骤​​

1. ​​蛋白质含量测定​​：按GB 9697-2008测定蜂王浆蛋白质质量分数（Ω）。
2. ​​标准曲线绘制​​：将DMF标准系列与NBT反应，测定530 nm吸光度，绘制浓度-吸光度曲线。
3. ​​试样测定​​：
   • ​​空白制备​​：试样加水代替NBT作为参比。
   • ​​反应条件​​：57℃水浴20分钟，测定530 nm吸光度。

​​9. 结果计算​​

• ​​公式​​：
  w=/frac{c/times V/times 249.26}{m/times/Omega}
  • 式中：c为DMF浓度（mmol/L），V为定容体积（0.2 L），249.26为DMF摩尔质量，m为试样质量（1 g），Ω为蛋白质质量分数（%）。
• ​​结果表示​​：平行测定均值，保留3位有效数字。

​​10. 精密度要求​​

• 两次独立测定结果的绝对差值不超过均值的10%。

​​11. 规范性引用文件​​

• GB/T 6682（实验室用水标准）、GB 9697-2008（蜂王浆行业标准）。

​​12. 注意事项​​

• ​​专利声明​​：标准可能涉及专利，但发布机构不承担识别责任。
• ​​试剂有效期​​：碳酸盐缓冲液、DMF/NBT储备液有效期均为3个月（2~8℃保存）。

​​13. 应用意义​​

• 该方法为蜂王浆质量控制提供了酮胺类糖化蛋白的定量检测手段，适用于生产、科研及市场监管。