NY/T 4500-2025 萝卜品种鉴定 SSR分子标记法
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- 标准类型：农牧渔类
- 标准语言：中文版
- 文件类型：PDF文档
- 更新时间：2025-06-13
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资料介绍
《萝卜品种鉴定SSR分子标记法》标准主要内容总结
一、标准概述
《萝卜品种鉴定SSR分子标记法》(NY/T 4500-2025)是由中华人民共和国农业农村部发布的农业行业标准，规定了利用简单重复序列(SSR)标记进行萝卜(Raphanus sativus L.)品种鉴定的技术规范。该标准由农业农村部种业管理司提出，全国植物新品种测试标准化技术委员会归口，山东省农业科学院作物研究所等单位起草。
二、适用范围
本文件适用于萝卜品种DNA分子数据采集和品种鉴定，可用于区分不同萝卜品种。标准适用于种子、幼苗、叶片等组织或器官的样品检测。
三、技术原理
该标准基于萝卜品种基因组中存在的SSR标记多态性进行品种鉴定。不同萝卜品种在同一SSR位点的重复次数存在差异，这种差异可通过PCR扩增及电泳方法进行检测，从而区分不同品种。
四、主要技术内容
1. 样品准备
- 送检样品可为种子、幼苗、叶片等组织或器官
- 种子样品扦样应符合GB/T 3543.2要求
- 每份样品不少于30个个体，等量混合分析
2. DNA提取
- 采用CTAB法提取DNA
- 详细描述了从组织研磨到DNA溶解保存的完整流程
- 要求DNA溶液的OD260/OD280比值介于1.7～2.0
3. PCR扩增
- 提供了标准反应体系(25μL总体积)和反应程序
- 采用降落PCR程序：15个循环(退火温度从65℃开始，每循环降1℃)加30个循环(50℃退火)
- 允许根据实验条件调整参数
4. PCR产物检测方法
标准提供了两种电泳检测方法：
(1) 垂直板变性PAGE
- 详细描述了制胶、变性、电泳和银染步骤
- 使用6%聚丙烯酰胺凝胶
- 1800V恒压电泳，时间根据产物大小调整(1.5-3.5小时)
(2) 荧光毛细管电泳
- 根据引物分组(附录F)混合不同荧光标记的扩增产物
- 使用DNA分析仪进行电泳
- 需加入分子量内标和去离子甲酰胺变性
5. 数据分析
- 通过比较扩增片段大小确定等位变异
- 纯合位点记录为X/X，杂合位点记录为X/Y
- 缺失位点记录为0/0
- 比对送检样品与对照样品的等位变异数据，统计差异位点数
6. 结果判定
- 差异位点数>2：判定为"不同"
- 差异位点数≤2：判定为"疑同"
五、配套附录内容
1. 规范性附录
- 附录A：详细列出了所需的主要仪器设备和试剂
- 附录B：提供了各种溶液的配制方法，包括DNA提取液、PCR试剂、电泳相关溶液等
- 附录C：包含20对SSR引物的名称、染色体位置和序列信息
2. 资料性附录
- 附录D：提供了每对引物的荧光标记建议、等位变异范围和主要等位变异大小
- 附录E：列出了28个参照品种的名称和来源
- 附录F：给出了荧光毛细管电泳时的引物分组方案
六、标准特点
- 技术全面性：涵盖了从样品准备到结果判定的完整流程
- 方法可选性：提供PAGE和荧光毛细管电泳两种检测方法
- 操作规范性：详细规定了各种试剂配制和实验步骤
- 数据可比性：通过参照品种确保不同实验室间数据的可比性
- 判定科学性：设定了明确的判定阈值(2个差异位点)
- 实用性：允许根据实际情况调整部分参数
该标准的实施将为萝卜品种鉴定提供统一的技术规范，有助于品种权保护、种子质量监管和品种真实性鉴定等工作。