NY/T 4661-2025 猫泛白细胞减少症诊断技术

中国农业行业标准 NY/T 4661-2025《猫泛白细胞减少症诊断技术》主要内容总结

​​1. 适用范围​​

本标准规定了猫泛白细胞减少症（FPV）的临床诊断、样本采集与处理、实验室检测方法及综合判定规则，适用于兽医机构对该病的诊断。

​​2. 临床诊断​​

• ​​临床症状​​
  • ​​分型​​：特急性（猝死）、急性（幼猫呕吐/腹泻，24h死亡）、亚急性（双相热、血便脱水）、亚临床（无症状感染）。
  • ​​孕猫感染​​：流产、死胎或幼猫神经症状。
• ​​血常规检查​​
  • ​​关键指标​​：白细胞显著减少（<4.0×10⁹/L，正常5.5-19.5×10⁹/L），白细胞<2.0×10⁹/L预后不良，可能伴贫血或血小板减少。

​​3. 样本采集与处理​​

• ​​采集​​：肛拭子或肠内容物，置于含0.5 mL灭菌PBS的样品管。
• ​​保存与运输​​：
  • 短期（48h内）：2-8℃冷藏；长期：-20℃冷冻。
  • 运输需全程冷链（冰袋或干冰），符合NY/T 541标准。

​​4. 实验室诊断方法​​

​​4.1 病毒分离与鉴定​​

• ​​细胞培养​​：使用F81细胞，盲传3代观察细胞病变（CPE）。
• ​​中和试验​​：阳性血清中和病毒后接种细胞，若无CPE则确诊。

​​4.2 金标试纸条检测​​

• 直接检测样本液，按说明书操作，快速筛查。

​​4.3 常规PCR​​

• ​​引物​​：F1/R1扩增VP2基因（386 bp）。
• ​​判定​​：电泳显示目标条带为阳性。

​​4.4 实时荧光定量PCR​​

• ​​探针法​​：F2/R2及FAM标记探针，Ct值≤38为阳性，38<Ct≤40需复检。

​​4.5 实时重组酶聚合酶扩增（Real-time RPA）​​

• ​​等温扩增​​：39℃下20分钟，结合荧光探针判读，Ct<40为阳性。

​​4.6 环介导等温扩增（LAMP）​​

• ​​荧光可视化​​：63℃扩增60分钟，绿色为阳性（橘黄为阴性）。

​​5. 质量控制与判定规则​​

• ​​阳性/阴性对照​​：
  • 阳性对照：含FPV病毒（TCID50≥10⁵.⁵/mL）。
  • 阴性对照：F81细胞培养液，PCR无扩增。
• ​​综合判定​​：
  • ​​疑似病例​​：临床表现或血常规异常+任一实验室阳性结果。
  • ​​排除感染​​：病毒分离/PCR等≥1项阴性结果。

​​6. 附录内容​​

• ​​溶液配制​​：PBS、TAE缓冲液配方。
• ​​阳性血清制备​​：猫免疫后血清中和效价≥1:256。
• ​​检测结果示意图​​：RPA荧光曲线、LAMP颜色变化示例。

​​7. 关键注意事项​​

• ​​方法选择​​：病毒分离为金标准但耗时长；分子法（PCR/RPA/LAMP）快速但需设备支持；试纸条适合现场初筛。
• ​​质量控制​​：严格对照试验确保结果可靠性。
• ​​术语规范​​：TCID50（半数细胞感染量）、Ct值（荧光阈值循环数）。

本文件为FPV诊断提供了从临床到实验室的完整技术流程，强调多方法联合应用以提高准确性，适用于不同场景下的疫病防控需求。