NY/T 4681-2025 饲料中6种雷琐酸内酯类化合物的测定 气相色谱-质谱法

中华人民共和国农业行业标准 NY/T 4681-2025 主要内容总结

​​1. 标准修订背景​​

• 替代农业部1486号公告-2010，主要修订内容：
  • 结构调整与编辑性修改；
  • 新增免疫亲和净化步骤（方法一）；
  • 增加附录A（化合物信息）和附录B（色谱图示例）。

​​2. 适用范围​​

• ​​检测对象​​：配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料中的6种雷琐酸内酯类化合物：
  • 玉米赤霉酮、α-玉米赤霉醇、β-玉米赤霉醇、玉米赤霉烯酮、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇。
• ​​检测限​​：2.0 μg/kg；​​定量限​​：5.0 μg/kg。

​​3. 规范性引用文件​​

• GB/T 6682《分析实验室用水规格和试验方法》；
• GB/T 20195《动物饲料试样的制备》。

​​方法一：免疫亲和净化气相色谱-质谱法​​

​​原理​​

• ​​提取​​：乙腈溶液提取样品；
• ​​净化​​：免疫亲和柱去除杂质；
• ​​衍生化​​：BSTFA+TMCS衍生；
• ​​检测​​：GC-MS分析，外标法定量。

​​试剂与仪器​​

• ​​关键试剂​​：乙腈、磷酸盐缓冲液（pH7.0）、玉米赤霉烯酮免疫亲和柱（容量1500 ng）、衍生化试剂（BSTFA+TMCS=99+1）。
• ​​仪器​​：气相色谱-质谱联用仪（EI源）、离心机（≥8000 r/min）、氮吹仪、振荡仪等。

​​样品处理​​

• ​​制备​​：粉碎过0.425 mm筛，基质空白样品需无目标物干扰。
• ​​提取​​：5 g样品加乙腈溶液振荡离心，取上清液稀释后过亲和柱。
• ​​净化​​：水淋洗后甲醇洗脱，氮吹浓缩衍生化（60℃ 15 min）。

​​测定条件​​

• ​​色谱柱​​：DB-5MS毛细管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；
• ​​升温程序​​：120℃→280℃（15℃/min），保持5.2 min；
• ​​质谱参数​​：EI源（70 eV），SIM模式，定性/定量离子见表1。

​​数据计算​​

• 标准曲线法（相关系数≥0.99）或单点校准（峰面积差异≤30%）；
• 公式计算含量，结果保留三位有效数字。

​​精密度​​

• 重复性条件下两次测定绝对差值≤均值的15%。

​​方法二：液液分配萃取气相色谱-质谱法​​

​​原理​​

• ​​提取​​：甲醇提取后浓缩；
• ​​净化​​：乙醚-碳酸钠液液分配、正己烷去除非极性杂质，HLB柱净化；
• ​​衍生化​​：同方法一；
• ​​检测​​：GC-MS分析，外标法定量。

​​试剂与仪器​​

• ​​关键试剂​​：甲醇、乙醚、正己烷、0.1%碳酸钠溶液、HLB柱（60 mg）。
• ​​仪器​​：旋转蒸发仪、固相萃取装置等。

​​样品处理​​

• ​​提取​​：甲醇两次提取，浓缩至干后乙醚溶解；
• ​​净化​​：液液分配去除水溶性杂质，正己烷去除非极性杂质，HLB柱洗脱；
• ​​衍生化​​：同方法一（体积100 μL）。

​​测定条件​​

• ​​色谱柱​​：DB-5MS，升温程序120℃→280℃（15℃/min），保持10 min；
• ​​质谱参数​​：EI源，SIM模式，定性/定量离子见表3（定量离子与方法一不同）。

​​数据计算​​

• 公式同方法一，注意稀释倍数（n）的影响。

​​精密度​​

• 重复性条件下两次测定绝对差值≤均值的20%。

​​附录信息​​

• ​​附录A​​：6种化合物的中英文名称、分子式、CAS号（如玉米赤霉酮C₁₈H₂₄O₅，CAS 5975-78-0）；
• ​​附录B​​：基质匹配标准溶液（50 ng/mL）的定量离子色谱图示例。

​​核心区别​​

本标准为饲料中雷琐酸内酯类化合物的检测提供了两种可靠方法，适用于不同实验室条件及检测需求。