T/NAIA 0371-2025 葡萄酒中5种羟基苯甲酸类物质的测定 高效液相色谱-串联质谱法

以下是团体标准《T/NAIA 0371—2025 葡萄酒中5种羟基苯甲酸类物质的测定 高效液相色谱-串联质谱法》的详细内容总结：

​​1. 标准基本信息​​

• ​​标准编号​​：T/NAIA 0371—2025
• ​​标准名称​​：葡萄酒中5种羟基苯甲酸类物质的测定 高效液相色谱-串联质谱法
• ​​归口单位​​：宁夏化学分析测试协会
• ​​起草单位​​：宁夏回族自治区食品检测研究院（国家市场监督管理总局重点实验室）、宁夏化学分析测试协会
• ​​适用范围​​：葡萄酒中​​没食子酸、香草酸、丁香酸、对羟基苯甲酸、原儿茶酸​​的定量测定。

​​2. 方法原理​​

• ​​提取​​：试样加水超声提取，经 ​​N-丙基乙二胺（PSA）分散固相萃取净化​​，过滤后上机。
• ​​检测​​：高效液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS），​​外标法定量​​。
• ​​离子模式​​：电喷雾离子源（ESI），​​负离子扫描​​。

​​3. 关键试剂与仪器​​

​​试剂​​

• 乙腈、甲醇（色谱纯）、甲酸（优级纯）、PSA粉末（50 μm）。
• ​​标准品​​：5种目标物（纯度 >95%），CAS号见附录A。
• ​​标准溶液配制​​：
  • 单标储备液（1.0 mg/mL）：甲醇溶解。
  • 混合中间液（10.0 μg/mL）：水稀释。
  • 混合使用液（10.0–500.0 ng/mL）：临用现配。

​​仪器​​

• LC-MS/MS（配备ESI源）、分析天平（0.1 mg）、涡旋混合器、超声波发生器、离心机（≥8000 r/min）、0.22 μm水相滤膜。

​​4. 分析步骤​​

​​试样制备​​

• 取摇匀葡萄酒样品，冷藏保存。

​​提取与净化​​

1. 取 ​​5.0 mL 样品​​ + ​​15 mL 水​​，涡旋混匀，超声提取 10 min。
2. 取 ​​2 mL 提取液​​ + ​​100 mg PSA 粉末​​，涡旋 5 min。
3. 离心（8000 r/min，3 min），上清液过 ​​0.22 μm 滤膜​​，待测。

​​LC-MS/MS 条件​​

• ​​色谱柱​​：C18柱（2.1 mm × 100 mm，1.8 μm）。
• ​​流动相​​：
  • ​​A​​：0.1% 甲酸水溶液
  • ​​B​​：乙腈
  • ​​梯度程序​​（流速 0.30 mL/min）：

    时间 (min)	A (%)	B (%)
    0.00	85	15
    1.00	85	15
    5.00	45	55
    6.00	15	85
    8.00	85	15

• ​​质谱参数​​：
  • 离子源温度：350℃
  • 毛细管电压：2.5 kV
  • 脱溶剂气流量：800 L/h
  • 碰撞气流速：0.18 mL/min
  • ​​MRM 离子对​​（详见附录B）：
    • 没食子酸（170.2 → 126.1）
    • 香草酸（198.3 → 154.0 / 183.0）
    • 丁香酸（168.2 → 124.0 / 153.1）
    • 对羟基苯甲酸（137.1 → 93.0）
    • 原儿茶酸（154.1 → 110.3）

​​5. 定性定量要求​​

• ​​定性​​：
  • 保留时间与标准品一致。
  • 离子丰度比偏差符合标准（如 >50% 时允许 ±20% 偏差）。
• ​​定量​​：
  • 外标法，标准曲线浓度范围 ​​10.0–500.0 ng/mL​​。
  • 计算公式：

    X = /frac{C /times V}{m /times 1000}  

    • X：含量（mg/L）
    • C：试液浓度（ng/mL）
    • V：试样总体积（mL）
    • m：试样质量（mL，此处等同于体积）。

​​6. 方法性能指标​​

• ​​定量限（LOQ）​​：5种目标物均为 ​​0.03 mg/L​​。
• ​​精密度​​：平行测定结果的相对偏差 ≤ ​​10%​​。
• ​​空白试验​​：每批次样品需同步进行空白对照。

​​7. 附录内容​​

• ​​附录A​​：5种目标物的化学信息（CAS号、分子式、纯度）。
• ​​附录B​​：详细的质谱参数（母离子/子离子、碎裂电压、碰撞能量）。
• ​​附录C​​：5种目标物的 ​​典型色谱图​​（展示分离效果）。

​​8. 其他声明​​

• ​​专利说明​​：标准可能涉及专利，但发布机构不承担识别责任。
• ​​引用标准​​：实验用水需符合 ​​GB/T 6682 一级水​​要求。

​​总结​​：本标准建立了葡萄酒中5种羟基苯甲酸类物质的 ​​LC-MS/MS 检测方法​​，涵盖样品前处理（水稀释+PSA净化）、仪器分析条件（色谱梯度与质谱参数）、定性定量规则及方法验证数据，适用于葡萄酒质量安全检测。