NY/T 4645-2025 裂谷热诊断技术

《NY/T 4645-2025 裂谷热诊断技术》主要内容总结

​​1. 标准概述​​

• ​​标准性质​​：中华人民共和国农业行业标准，2025年实施，归口于全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181）。
• ​​目的​​：规范裂谷热（RVF）的诊断技术，提升我国对RVF的监测和防控能力，防范外来动物疫病风险。
• ​​适用范围​​：适用于羊、牛、骆驼、野生动物等RVF的诊断、检疫、监测及流行病学调查。

​​2. 裂谷热背景​​

• ​​病原体​​：裂谷热病毒（RVFV），属布尼亚病毒目白纤病毒科，单股负链RNA病毒，分L、M、S三节段。
• ​​传播途径​​：
  • ​​虫媒传播​​：库蚊、伊蚊、蜱等叮咬或虫媒卵长期存活传播。
  • ​​接触传播​​：接触感染动物组织、体液等。
  • ​​其他途径​​：呼吸道（气溶胶）、消化道（未煮熟的肉奶）、垂直传播（胎盘）。
• ​​易感动物​​：绵羊（最易感）、山羊、牛、骆驼、野生动物及人。
• ​​流行特征​​：夏秋雨季高发，暴雨后易暴发，动物流产和幼畜死亡伴随人员感染。

​​3. 诊断方法​​

​​3.1 临床诊断​​

• ​​流行病学​​：动物流产、幼畜死亡及人员发病史，蚊虫活跃季节高发。
• ​​临床症状​​：
  • ​​动物​​：发热、流产、肝炎、幼畜高死亡率（羔羊可达100%）。
  • ​​人​​：流感样症状，少数出现脑炎、出血性肝病等。
• ​​判定标准​​：符合至少1项流行病学特征和1条临床症状，判为疑似病例，需实验室确诊。

​​3.2 实验室诊断​​

​​（1）病毒分离与鉴定​​

• ​​样品处理​​：组织研磨或血液冻融后离心过滤。
• ​​细胞培养​​：接种BHK或Vero细胞，观察细胞病变（CPE），盲传3代。
• ​​结果判定​​：CPE阳性或RT-PCR检测阳性为病毒分离阳性。

​​（2）RT-PCR检测​​

• ​​靶基因​​：NSs基因（668 bp片段）。
• ​​步骤​​：RNA提取→反转录→PCR扩增→电泳分析。
• ​​判定​​：出现668 bp条带且测序匹配为阳性。

​​（3）实时荧光RT-PCR​​

• ​​靶基因​​：Gn基因，探针标记FAM荧光。
• ​​判定​​：Ct值≤36且扩增曲线典型为阳性；Ct>36需复检。

​​（4）IgM捕获ELISA（仅牛、羊血清）​​

• ​​原理​​：检测血清中RVFV特异性IgM抗体。
• ​​判定​​：S/P（样品/阳性对照比值）≥0.5为阳性；0.4<S/P<0.5需复检。

​​4. 样品采集与生物安全​​

• ​​采集要求​​：
  • 活畜：EDTA抗凝血、血清；死畜：肝、脾、脑组织等。
  • 防护：穿戴防护装备，防蚊虫叮咬和利器刺伤。
• ​​保存运输​​：4℃冷藏24小时内送达，长期保存需-70℃。
• ​​生物安全​​：病毒分离需BSL-3实验室，操作遵循GB 19489等标准。

​​5. 综合判定​​

• ​​确诊病例​​：临床疑似且任一实验室方法阳性。
• ​​隐性感染​​：无症状但实验室检测阳性。
• ​​既往感染​​：仅IgM阳性而核酸检测阴性。

​​6. 附录内容​​

• ​​溶液配制​​：PBS、甘油保存液、TAE缓冲液、ELISA试剂等详细配方。
• ​​引物探针序列​​：RT-PCR（NS2g/NS3a）、荧光PCR（RVS/RVAs/RVP）的基因位置及序列。
• ​​扩增曲线示例​​：图示阳性/阴性结果对比。

​​7. 实施意义​​

• 为RVF早期诊断提供标准化技术，助力疫情预警和防控，保障畜牧业安全及公共卫生。

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