T/ZHCA 031-2024 化妆品舒缓功效测试 淋洗类化妆品温和性评价 重建表皮模型组织活力法
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- 标准类型：团体标准规范
- 标准语言：中文版
- 文件类型：PDF文档
- 更新时间：2025-06-17
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资料介绍
以下是《淋洗类化妆品温和性评价 重建表皮模型组织活力法》（T/ZHCA 031—2024）标准文件的详细内容总结：
一、标准基本信息
- 发布机构：浙江省健康产品化妆品行业协会（ZHCA）
- 起草依据：GB/T 1.1—2020《标准化工作导则》
- 适用范围：淋洗类化妆品（如洗发水、沐浴露等使用后需清洗的产品）的温和性功效评价。
- 核心原理：通过测量化妆品对重建人表皮模型细胞存活率的影响，评估其温和性（即是否引起皮肤异常反应）。
二、关键术语定义
- 淋洗类化妆品：人体表面使用后需及时清洗的产品（皮肤、毛发、甲、口唇等）。
- 温和性：产品在合理使用条件下不引起皮肤异常反应的特性。
- 重建表皮模型：人表皮细胞体外培养形成的三维结构模型（如EpiKutis™ RHE、SkinEthic™ RHE），需符合特定质检标准。
三、试验核心流程
1. MTT干扰因素排查
- 与MTT反应排查：若样品使MTT溶液变蓝紫色，需增加死亡组织模型组（-20℃冷冻24小时以上）。
- 有色样品干扰：若样品溶于异丙醇且OD₅₇₀ ≥ 0.15，需增加死亡模型组校正背景干扰。
2. 测试方法（分两种模型）
| 项目 | 方法一（EpiKutis™ RHE） | 方法二（SkinEthic™ RHE） |
|---|---|---|
| 样品浓度 | 1.0% 样品液 | 7.5% 样品液 |
| 暴露时间 | 24小时 | 18小时 |
| 模型数量 | 3个平行模型/组 | 2个平行模型/组 |
| 加样方式 | 80μL均匀涂抹 | 30μL涂抹后加盖尼龙膜 |
| 培养板规格 | 6孔板 → 24孔板（MTT） | 12孔板 → 24孔板（MTT） |
3. 通用步骤
- 模型复苏：培养过夜，确保模型与培养基无气泡。
- 分组：
- 阴性对照组（水或空白）
- 阳性对照组（1.0% Triton X-100或0.1% SDS）
- 受试样品组（±死亡组织模型组）
- 暴露后处理：
① DPBS冲洗至无残留；
② MTT染色3小时（37°C）；
③ 异丙醇提取甲臢（振荡2小时或4°C过夜）；
④ 测定OD₅₇₀（酶标仪，570nm）。
四、数据处理与结果判定
1. 存活率计算
- 无干扰时：
/text{存活率} = /frac{/text{样品OD} - /text{溶剂OD}}{/text{阴性对照OD} - /text{溶剂OD}} /times 100/% - 有干扰时（死亡模型校正）：
/text{存活率} = /frac{(/text{样品OD} - /text{溶剂OD}) - (/text{死亡样品OD} - /text{死亡阴性OD})}{/text{阴性对照OD} - /text{溶剂OD}} /times 100/%
2. 试验有效性条件
- 阴性对照组OD₅₇₀ 1.0–2.5；
- 阳性对照组存活率 <15%；
- 复孔间标准偏差（SD）<18%。
3. 温和性评价
- 温和：存活率 ≥50%；
- 需进一步验证：存活率 <50%（结合其他试验确认）。
五、关键试剂与仪器
- 试剂：
- MTT溶液（1 mg/mL，现配现用）、Triton X-100（1.0%）、SDS（0.1%）、异丙醇、DPBS（无钙镁离子）。
- 重建表皮模型试剂盒（需提供质检报告）。
- 仪器：
- CO₂培养箱（37±1°C, 5% CO₂, ≥95%湿度）、酶标仪（570nm）、移液器、微孔板振荡器。
六、试验报告要求
报告需包含：
- 检验依据、样品理化性状；
- 表皮模型来源及质检信息；
- 试验步骤细节（分组、暴露条件）；
- 数据处理方法、结果评价；
- 试验日期、结论、检验人签字及单位公章。
七、参考文献
- OECD TG 439（体外皮肤刺激性测试）
- 《化妆品安全技术规范》（2015版）
- GB 3101—1993（量、单位与符号规范）
总结：该标准通过标准化体外重建表皮模型测试，以细胞存活率为核心指标，为淋洗类化妆品的温和性评价提供了可量化、可重复的科学方法，同时严格规范了试验有效性条件与干扰校正流程，确保结果可靠性。