T/NAIA 0375-2025 枸杞中6种链格孢霉毒素的测定 液相色谱-串联质谱法

T/NAIA 0375-2025标准主要内容的详细总结：

​​标准核心目标：​​ 建立并规范一种使用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）同时测定枸杞（包括枸杞子和枸杞鲜果）中6种特定链格孢霉毒素含量的检测方法。

​​1. 适用范围：​​

• ​​目标物：​​ 6种链格孢霉毒素，具体为：
  • 交链孢酚 (Alternariol, AOH)
  • 格孢毒素-I (Altertoxin I, ATX-I)
  • 链格孢酚单甲醚 (Alternariol Monomethyl Ether, AME)
  • 番茄交链孢菌毒素 (AAL toxin, AAL)
  • 交链孢烯 (Altenuene, ALT)
  • 腾毒素 (Tentoxin, TEN)
• ​​适用样品：​​ 枸杞子（干枸杞）和枸杞鲜果。

​​2. 方法原理：​​

• ​​提取：​​ 使用乙腈作为提取溶剂。
  • 枸杞鲜果：样品 + 乙腈 + 氯化钠 → 涡旋混合 → 超声提取 → 离心。
  • 枸杞子（干果）：样品 + 水 → 涡旋 → 静置复水 → 后续提取步骤同鲜果（加乙腈 + 氯化钠 → 涡旋 → 超声 → 离心）。
• ​​净化：​​ 采用分散固相萃取（dSPE）技术。
  • 取一定量上清液 → 加入N-丙基乙二胺(PSA)和十八烷基(C₁₈)粉末 → 涡旋混合 → 离心 → 取上清液。
• ​​分析检测：​​
  • 净化后的上清液经0.22μm有机相滤膜过滤。
  • 使用液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）进行分析。
  • 采用​​外标法定量​​，标准曲线需用​​空白样品基质溶液​​配制。

​​3. 关键试剂与材料：​​

• ​​主要溶剂：​​ 乙腈（色谱纯）、甲醇（色谱纯）。
• ​​添加剂：​​ 甲酸（优级纯）、氯化钠（分析纯）。
• ​​净化剂：​​ PSA粉末（50μm）、C₁₈粉末（50μm）。
• ​​溶液配制：​​ 0.1%甲酸水溶液、0.1%甲酸乙腈溶液。
• ​​标准品：​​ 要求使用高纯度标准品（纯度见附录A）。详细列出了6种毒素的中文名、英文缩写、CAS号、分子式（附录A）。
• ​​标准溶液配制：​​
  • 标准储备液（1.0 mg/mL，乙腈溶解，-18℃避光，6个月）。
  • 混合标准中间液（10.0 μg/mL，乙腈稀释，-18℃避光，3个月）。
  • 基质匹配标准工作液（临用现配，浓度范围：0.5 ng/mL 至 100.0 ng/mL）。

​​4. 仪器设备：​​

• 核心设备：配备电喷雾离子源（ESI）的液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）。
• 辅助设备：精密天平（0.01mg和0.01g感量）、高速粉碎机、涡旋混合器、超声波发生器、高速离心机（≥6000 r/min）、0.22 μm有机相滤膜。

​​5. 分析步骤细节：​​

• ​​样品制备：​​ 样品需经高速粉碎机粉碎，并在-18℃或以下保存。
• ​​提取与净化：​​ 如原理所述，区分鲜果和干果的处理起始步骤。
• ​​仪器参考条件：​​
  • ​​液相色谱(LC)：​​
    • 色谱柱：C18柱（2.1 mm × 100 mm, 1.7 μm）。
    • 柱温：30°C。
    • 流动相：A相 - 0.1%甲酸水溶液；B相 - 0.1%甲酸乙腈溶液。
    • 流速：0.3 mL/min。
    • 进样量：10 μL。
    • ​​梯度洗脱程序（核心条件）：​​

      时间(min)	流速(mL/min)	A相(%)	B相(%)
      0.00	0.3	95	5
      4.00	0.3	10	90
      6.00	0.3	10	90
      6.01	0.3	95	5
      8.00	0.3	95	5

  • ​​质谱(MS)：​​
    • 离子源：电喷雾离子源（ESI）。
    • 扫描方式：正离子扫描和负离子扫描（需根据目标物选择）。
    • 检测方式：多反应监测（MRM）。
    • 关键参数：鞘气温度(350℃)、鞘气流速(12.0 L/min)、脱溶剂气温度(325℃)、脱溶剂气流速(8.0 L/min)、毛细管电压(正模式3500V，负模式4000V)。
    • ​​质谱参数（关键，见附录B）：​​ 详细列出了每种毒素的母离子(m/z)、子离子(m/z)（包括定量离子*和定性离子）、碎裂电压(V)、碰撞能量(eV)。
• ​​定性确证：​​ 需同时满足两个条件：
  • ​​保留时间：​​ 样品峰保留时间与标准物质保留时间的相对误差在±2.5%以内。
  • ​​离子丰度比：​​ 样品中目标物各监测离子的相对丰度比与标准溶液相比，偏差不超过规定范围（如相对丰度>50%时允许±20%偏差）。
• ​​定量测定：​​ 使用基质匹配标准溶液建立校准曲线进行外标法定量。样品浓度需在线性范围内，超出则需稀释。
• ​​空白试验：​​ 必须进行空白试验以监控背景干扰。

​​6. 结果计算：​​

• ​​公式：​​ X = (C × V × 1000) / (m × 1000) [注：原文公式单位mg/kg应为μg/kg之误，计算逻辑实际得到μg/kg]
  • X: 试样中各化合物含量，单位为​​微克每千克 (μg/kg)​​。
  • C: 由标准曲线计算出的试样溶液浓度，单位为纳克每毫升 (ng/mL)。
  • V: 提取液体积，单位为毫升 (mL)。（注：根据提取步骤，V对于鲜果为10mL，对于干果（加水5mL后加乙腈5mL）也为10mL）
  • m: 试样质量，单位为克 (g)。（注：鲜果10g，干果5g）
• ​​结果表示：​​ 平行测定结果的算术平均值，保留三位有效数字。

​​7. 方法性能指标：​​

• ​​精密度：​​ 在重复性条件下，两次独立测定结果的绝对差值不得超过其算术平均值的10%。
• ​​定量限 (LOQ)：​​ 6种链格孢霉毒素的定量限均为 ​​1.5 μg/kg​​。

​​8. 附录 (重要参考资料)：​​

• ​​附录A (资料性)：​​ 6种链格孢霉毒素的详细信息：中文名称、英文缩写、CAS号、化学分子式、纯度。
• ​​附录B (资料性)：​​ 6种链格孢霉毒素的详细质谱参数（母离子、子离子、碎裂电压、碰撞能量），明确标注了定量离子对。
• ​​附录C (资料性)：​​ 6种链格孢霉毒素定量离子对的典型色谱图，用于参考分离效果和保留时间。

​​9. 标准管理信息：​​

• 归口单位：宁夏化学分析测试协会。
• 主要起草单位：宁夏回族自治区食品检测研究院（国家市场监督管理总局重点实验室）、宁夏化学分析测试协会。
• 主要起草人：马桂娟、朱燕燕、马雪梅、郭阳、李强、姚晓瑜、吕毅、吴明、张小飞。
• 编制依据：GB/T 1.1-2020。

​​总结来说，T/NAIA 0375-2025标准详细规定了一套从样品前处理（针对鲜果和干果不同处理）、净化（dSPE）、LC-MS/MS分析（包括具体的色谱和质谱条件）、定性定量规则、到结果计算和报告的方法流程，用于精准测定枸杞中6种关键链格孢霉毒素的含量，并明确了方法的精密度和定量限等关键性能指标。​​ 附录提供了目标物信息、仪器参数和典型图谱等实用参考资料。

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