T/GXDSL 011-2024 基因工程菌低温智能保藏存技术规程
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资料介绍
ICS 19 .040
M 731
团体标准
T/GXDSL 011—2024
基因工程菌低温智能保藏存技术规程
Standard Operating Procedure for Low-Temperature Intelligent Preservation ofGenetically Engineered Microorganisms
2024 - 12 - 28 发布2024 - 12 - 29 实施
广西电子商务企业联合会发布
目 次
前 言............................................................................. II
一、范围.............................................................................. 1
二、规范性引用文件.................................................................... 1
三、术语和定义........................................................................ 1
1. 基因工程菌....................................................................... 1
2. 低温智能保藏..................................................................... 1
四、保藏设施与设备.................................................................... 2
1. 低温保藏设备..................................................................... 2
2. 保藏容器......................................................................... 2
五、保藏前准备........................................................................ 2
1. 基因工程菌的鉴定................................................................. 2
2. 保护剂的选择与制备............................................................... 3
六、保藏操作.......................................................................... 3
1. 菌液制备......................................................................... 3
2. 分装与标记....................................................................... 3
3. 降温程序......................................................................... 3
七、保藏后管理与监测.................................................................. 4
1. 库存管理......................................................................... 4
2. 环境监测......................................................................... 4
八、菌种复苏与质量控制................................................................ 4
1. 复苏方法......................................................................... 4
2. 质量检测......................................................................... 4
九、安全与防护........................................................................ 5
十、废弃物处理........................................................................ 5
十一、附则............................................................................ 5
T/GXDSL 011—2024
II
前 言
本文件依据GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起
草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由广西产学研科学研究院提出。
本文件由广西电子商务企业联合会归口。
本文件起草单位：广西研科院高新技术有限公司，广西西蓝脑科技有限公司，广西产学研科学研究
院，广西玉美人电子商务有限公司，广西研科院传媒有限公司，广西众臻大数据科技有限公司，广
西茶福茶禧生态农业科技有限公司，广西玉美人电子商务有限公司，西安蓝脑科技有限公司，广西
泽灵科技有限公司.
本文件主要起草人：庄文斌，周伯韬， 盛友平，韦新,严祥卫，甘汉才,梅华,赖桂华，张婷，许春
香.
本文件为首次发布。
T/GXDSL 011—2024
1
基因工程菌低温智能保藏存技术规程
一、范围
本标准规定了基因工程菌低温智能保藏的术语和定义、保藏设施与设备、保藏前准备、保藏操作、
保藏后管理与监测、菌种复苏与质量控制等技术要求。
本标准适用于从事基因工程菌研究、开发、生产及相关应用领域的机构对基因工程菌的低温智能保
藏。
二、规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
• GB 19489《实验室生物安全通用要求》
• GB/T 27405《实验室质量控制规范食品微生物检测》
• [具体微生物菌种保藏机构的相关标准，如中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC）的菌种保
藏技术规范等]
三、术语和定义
1. 基因工程菌
通过基因工程技术，将外源基因导入宿主菌中，使其获得特定的遗传性状或功能的菌株。
2. 低温智能保藏
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2
利用智能控制的低温环境，结合特定的保藏介质和方法，维持基因工程菌的活性、稳定性和遗传完
整性的保藏技术。
四、保藏设施与设备
1. 低温保藏设备
应配备高精度低温冰箱，温度范围可精确控制在-20℃至-80℃，温度波动不超过±1℃。智能监
控系统应能实时监测温度、湿度等环境参数，并具备远程报警功能，当温度偏离设定范围时，能及时通
过短信、邮件等方式通知管理人员。
2. 保藏容器
采用耐低温、密封性能良好的冻存管，材质应为聚丙烯等惰性材料，容积规格为1.5 mL - 2.0 mL。
管盖应密封严实，防止渗漏和交叉污染。
五、保藏前准备
1. 基因工程菌的鉴定
保藏前应采用分子生物学方法（如PCR、DNA 测序等）对基因工程菌进行基因型鉴定，确定其携带
的外源基因序列及遗传稳定性。同时进行表型鉴定，包括菌落形态、生长特性、产物表达等特征分析，
确保菌种的准确性和纯度。
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2. 保护剂的选择与制备
根据基因工程菌的特性选择合适的保护剂，如甘油、二甲基亚砜（DMSO）等。保护剂应经过滤除菌
处理，甘油终浓度一般为10% - 20%（体积分数），DMSO 终浓度一般为5% - 10%（体积分数）。
六、保藏操作
1. 菌液制备
将处于对数生长期的基因工程菌离心收集，用预冷的无菌保护剂重悬菌体，使菌体浓度达到1×
10^8 - 1×10^9 CFU/mL。
2. 分装与标记
将菌液分装至冻存管中，每管分装量为0.5 mL - 1.0 mL。在冻存管外清晰标注菌种名称、编号、
保藏日期、保藏人等信息。
3. 降温程序
采用梯度降温法，先将冻存管置于-40℃预冷30 - 60 分钟，然后以每分钟1℃ - 2℃的速率降
至-80℃。
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七、保藏后管理与监测
1. 库存管理
建立完善的菌种库存管理系统，记录菌种的出入库信息、保藏位置、保藏时间等。定期对库存菌种
进行盘点，确保菌种信息的准确性和完整性。
2. 环境监测
定期对低温保藏设备的温度、湿度等环境参数进行校准和记录，每月至少进行一次全面检查。如发
现设备故障或环境参数异常，应及时采取措施修复，并对受影响的菌种进行评估和处理。
八、菌种复苏与质量控制
1. 复苏方法
从低温保藏环境中取出冻存管，迅速置于37℃水浴中解冻，解冻时间不超过2 分钟。然后将菌液
接种至适宜的培养基中，在适宜的培养条件下培养。
2. 质量检测
复苏后的菌种应进行纯度检测，采用平板划线法观察菌落形态是否一致，有无杂菌污染。同时进行
活性检测，测定菌体浓度和产物表达量等指标，与保藏前的数据进行对比，评估菌种的质量和稳定性。
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九、安全与防护
在基因工程菌保藏过程中，应严格遵守国家有关生物安全的法律法规和标准规范。操作人员应穿戴
防护服、口罩、手套等防护用品，在生物安全柜内进行菌种操作，防止基因工程菌的泄漏和扩散，避免
对人员和环境造成危害。
十、废弃物处理
保藏过程中产生的废弃物，如废弃的冻存管、培养基等，应经过高温高压灭菌处理后，按照医疗废
弃物或实验室废弃物的相关规定进行分类收集和处理。
十一、附则
1. 本规范自发布之日起实施。上一篇：T/GXDSL 010-2024 专业技术服务能力等级资质评定技术规范
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团体标准
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基因工程菌低温智能保藏存技术规程
Standard Operating Procedure for Low-Temperature Intelligent Preservation ofGenetically Engineered Microorganisms
2024 - 12 - 28 发布2024 - 12 - 29 实施
广西电子商务企业联合会发布
目 次
前 言............................................................................. II
一、范围.............................................................................. 1
二、规范性引用文件.................................................................... 1
三、术语和定义........................................................................ 1
1. 基因工程菌....................................................................... 1
2. 低温智能保藏..................................................................... 1
四、保藏设施与设备.................................................................... 2
1. 低温保藏设备..................................................................... 2
2. 保藏容器......................................................................... 2
五、保藏前准备........................................................................ 2
1. 基因工程菌的鉴定................................................................. 2
2. 保护剂的选择与制备............................................................... 3
六、保藏操作.......................................................................... 3
1. 菌液制备......................................................................... 3
2. 分装与标记....................................................................... 3
3. 降温程序......................................................................... 3
七、保藏后管理与监测.................................................................. 4
1. 库存管理......................................................................... 4
2. 环境监测......................................................................... 4
八、菌种复苏与质量控制................................................................ 4
1. 复苏方法......................................................................... 4
2. 质量检测......................................................................... 4
九、安全与防护........................................................................ 5
十、废弃物处理........................................................................ 5
十一、附则............................................................................ 5
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II
前 言
本文件依据GB/T 1.1-2020 《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起
草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由广西产学研科学研究院提出。
本文件由广西电子商务企业联合会归口。
本文件起草单位：广西研科院高新技术有限公司，广西西蓝脑科技有限公司，广西产学研科学研究
院，广西玉美人电子商务有限公司，广西研科院传媒有限公司，广西众臻大数据科技有限公司，广
西茶福茶禧生态农业科技有限公司，广西玉美人电子商务有限公司，西安蓝脑科技有限公司，广西
泽灵科技有限公司.
本文件主要起草人：庄文斌，周伯韬， 盛友平，韦新,严祥卫，甘汉才,梅华,赖桂华，张婷，许春
香.
本文件为首次发布。
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1
基因工程菌低温智能保藏存技术规程
一、范围
本标准规定了基因工程菌低温智能保藏的术语和定义、保藏设施与设备、保藏前准备、保藏操作、
保藏后管理与监测、菌种复苏与质量控制等技术要求。
本标准适用于从事基因工程菌研究、开发、生产及相关应用领域的机构对基因工程菌的低温智能保
藏。
二、规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
• GB 19489《实验室生物安全通用要求》
• GB/T 27405《实验室质量控制规范食品微生物检测》
• [具体微生物菌种保藏机构的相关标准，如中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC）的菌种保
藏技术规范等]
三、术语和定义
1. 基因工程菌
通过基因工程技术，将外源基因导入宿主菌中，使其获得特定的遗传性状或功能的菌株。
2. 低温智能保藏
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利用智能控制的低温环境，结合特定的保藏介质和方法，维持基因工程菌的活性、稳定性和遗传完
整性的保藏技术。
四、保藏设施与设备
1. 低温保藏设备
应配备高精度低温冰箱，温度范围可精确控制在-20℃至-80℃，温度波动不超过±1℃。智能监
控系统应能实时监测温度、湿度等环境参数，并具备远程报警功能，当温度偏离设定范围时，能及时通
过短信、邮件等方式通知管理人员。
2. 保藏容器
采用耐低温、密封性能良好的冻存管，材质应为聚丙烯等惰性材料，容积规格为1.5 mL - 2.0 mL。
管盖应密封严实，防止渗漏和交叉污染。
五、保藏前准备
1. 基因工程菌的鉴定
保藏前应采用分子生物学方法（如PCR、DNA 测序等）对基因工程菌进行基因型鉴定，确定其携带
的外源基因序列及遗传稳定性。同时进行表型鉴定，包括菌落形态、生长特性、产物表达等特征分析，
确保菌种的准确性和纯度。
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2. 保护剂的选择与制备
根据基因工程菌的特性选择合适的保护剂，如甘油、二甲基亚砜（DMSO）等。保护剂应经过滤除菌
处理，甘油终浓度一般为10% - 20%（体积分数），DMSO 终浓度一般为5% - 10%（体积分数）。
六、保藏操作
1. 菌液制备
将处于对数生长期的基因工程菌离心收集，用预冷的无菌保护剂重悬菌体，使菌体浓度达到1×
10^8 - 1×10^9 CFU/mL。
2. 分装与标记
将菌液分装至冻存管中，每管分装量为0.5 mL - 1.0 mL。在冻存管外清晰标注菌种名称、编号、
保藏日期、保藏人等信息。
3. 降温程序
采用梯度降温法，先将冻存管置于-40℃预冷30 - 60 分钟，然后以每分钟1℃ - 2℃的速率降
至-80℃。
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4
七、保藏后管理与监测
1. 库存管理
建立完善的菌种库存管理系统，记录菌种的出入库信息、保藏位置、保藏时间等。定期对库存菌种
进行盘点，确保菌种信息的准确性和完整性。
2. 环境监测
定期对低温保藏设备的温度、湿度等环境参数进行校准和记录，每月至少进行一次全面检查。如发
现设备故障或环境参数异常，应及时采取措施修复，并对受影响的菌种进行评估和处理。
八、菌种复苏与质量控制
1. 复苏方法
从低温保藏环境中取出冻存管，迅速置于37℃水浴中解冻，解冻时间不超过2 分钟。然后将菌液
接种至适宜的培养基中，在适宜的培养条件下培养。
2. 质量检测
复苏后的菌种应进行纯度检测，采用平板划线法观察菌落形态是否一致，有无杂菌污染。同时进行
活性检测，测定菌体浓度和产物表达量等指标，与保藏前的数据进行对比，评估菌种的质量和稳定性。
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5
九、安全与防护
在基因工程菌保藏过程中，应严格遵守国家有关生物安全的法律法规和标准规范。操作人员应穿戴
防护服、口罩、手套等防护用品，在生物安全柜内进行菌种操作，防止基因工程菌的泄漏和扩散，避免
对人员和环境造成危害。
十、废弃物处理
保藏过程中产生的废弃物，如废弃的冻存管、培养基等，应经过高温高压灭菌处理后，按照医疗废
弃物或实验室废弃物的相关规定进行分类收集和处理。
十一、附则
1. 本规范自发布之日起实施。