NY/T 4510-2025 月季霜霉病抗性鉴定技术规程

NY/T 4510-2025《月季霜霉病抗性鉴定技术规程》的核心内容总结：

​一、范围与适用性​

• 规定了月季（Rosa spp.）种质对霜霉病（病原菌 Peronospora sparsa）的抗性鉴定方法和程序。
• 适用于室内人工接种鉴定，涵盖设施设备、病原体制备、鉴定方法、病情调查、抗性评价及材料处理。

​二、关键术语定义​

1. ​月季霜霉病​：由蔷薇霜霉菌（Peronospora sparsa）引起的卵菌病害，危害叶片、嫩梢等，病斑呈黄褐色，湿度高时叶背可见灰白色霉层。
2. ​病情指数（DI）​​：综合发病率和严重度的量化指标，计算公式：
   DI=U×S∑(Fi​×Ui​)​×100
   • Fi​：病情级别（0/1/3/5/7/9）；
   • Ui​：对应病情级别的植株/叶片数；
   • U：调查总数；
   • S：最高病情级值（取9）。
3. ​病原物接种体​：用于接种的病原繁殖体（如孢子悬浮液）。

​三、设施与材料要求​

• ​设施​：隔离温室、恒温培养箱（温控1–35℃）、灭菌锅、超净工作台、显微镜等。
• ​耗材​：灭菌培养皿、移液器、血球计数板、保鲜膜等。
• ​鉴定材料​：
  • 组培苗：苗高≥20cm，茎节≥5个，复叶≥4片（炼苗80–90天）。
  • 扦插苗：苗高≥25cm，要求同组培苗。
  • 离体叶片：中上部健康叶，表面消毒后使用。

​四、病原体制备流程​

1. ​采集与鉴定​：
   • 采集典型病叶，显微镜下形态学鉴定，经科赫氏法则验证。
2. ​纯化与繁殖​：
   • 病叶冲洗后黑暗保湿培养（18±2℃），光照诱导孢子囊产生。
   • 孢子囊用灭菌毛笔刷取，制成孢子悬浮液（浓度：1–1.5×10⁴个/mL）。
   • 感病品种扩繁：针刺叶片后滴接种液，保湿培养5–7天。
3. ​保存​：
   • 短期：活体接种感病寄主保存；
   • 长期：病叶加10%甘油液氮冻存。

​五、鉴定方法​

1. ​环境控制​：
   • 温度14–20℃，湿度≥80%，离体叶片需黑暗24小时后每日光照14小时。
2. ​对照设置​：
   • ​抗病对照​：安吉拉、卡罗拉；
   • ​感病对照​：心相印、梦露等（附录B）。
   • 空白对照：无菌水替代接种液。
3. ​接种方法​：
   • ​植株喷雾法​：喷至叶尖滴水，套袋保湿3–6天。
   • ​离体叶片液滴法​：每叶滴15–20μL孢子液，保鲜膜密封。

​六、病情调查与抗性评价​

1. ​调查时间​：
   • 植株接种后4–6天，离体叶片3–4天（根据感病对照发病调整）。
2. ​病情分级标准​：

   ​类型​	​病情级别​	​症状描述​
   ​幼苗​	0级	无症状
   	1级	病叶≤10%
   	9级	病叶＞75%，叶片枯落
   ​叶片​	0级	无症状
   	9级	病斑＞60%或枯死
   （详见标准表1、表2）

3. ​抗性评价标准​：

   ​病情指数（DI）​​	​抗性级别​
   0.00	免疫（I）
   0.01–5.00	高抗（HR）
   5.01–10.00	抗病（R）
   10.01–20.00	中抗（MR）
   20.01–40.00	中感（MS）
   ＞40.00	高感（HS）

   • ​有效性要求​：感病对照DI＞20.00，抗病对照符合预期。
4. ​复检规则​：
   • 初次鉴定为抗病（R/MR）需复检；
   • 两次结果不一致时第三次鉴定，以最高DI或多数结果为准。

​七、鉴定后处理​

• 所有病株、病叶无害化处理；
• 带病菌基质需130℃蒸汽灭菌30分钟。

​八、附录关键信息​

• ​病原特征​（附录A）：
  • 孢子囊椭圆形（12.9–24.7μm），最适萌发温度18℃，26℃以上死亡。
  • 传播依赖高湿环境（湿度≥80%），温室通风不良易爆发。
• ​记录表格​（附录C）：
  包括病情分级统计表、鉴定结果原始记录表（含品种来源、接种日期等）。

​总结​

本标准系统规范了月季霜霉病抗性鉴定的全流程技术细节，涵盖病原体制备、标准化接种、量化病情评价及生物安全处理，为月季抗病育种和病害防控提供科学依据。核心在于通过精确的环境控制、接种浓度及分级标准，确保鉴定结果的可重复性和可靠性。