T/CFIAS 6011-2024《宠物添加剂预混合饲料中6种水溶性维生素的测定高效液相色谱法》主要内容总结

1. 标准概述

该标准由中国饲料工业协会发布，规定了宠物添加剂预混合饲料中6种水溶性维生素（维生素B1、B2、B6、烟酸、烟酰胺和叶酸）含量的高效液相色谱测定方法。标准于2024年9月23日发布，2024年10月19日实施。

2. 适用范围

• 适用于标称含有水溶性维生素的宠物添加剂预混合饲料
• 定量限：维生素B1、B2、B6、烟酰胺为30 mg/kg；烟酸、叶酸为50 mg/kg

3. 方法原理

• 维生素B1、B2、B6、烟酰胺：酸性溶液提取
• 烟酸：水提取后固相萃取小柱净化
• 叶酸：碱性溶液提取
• 高效液相色谱仪测定，外标法定量

4. 主要试剂与仪器

关键试剂：

• 甲醇（色谱纯）、庚烷磺酸钠（色谱纯）
• 0.1 mol/L盐酸溶液、1%冰乙酸溶液
• 甲醇/氯化铵溶液(1+9)、2 mol/L碳酸钠溶液
• 5%甲酸溶液、特定配制的流动相
• 6种维生素标准储备溶液（需避光保存）

主要仪器：

• 高效液相色谱仪（配紫外检测器或二极管阵列检测器）
• 分析天平（精度0.1mg）
• 恒温水浴锅、超声波清洗仪
• 离心机（≥7000r/min）、酸度计（±0.01精度）

5. 样品制备与处理

样品制备：

按GB/T 20195制备，固体试样粉碎过0.425mm筛，避光保存

提取方法：

1. ​​维生素B1、B2、B6、烟酰胺​​：冰乙酸溶液提取，100℃水浴加热30分钟
2. ​​含吸附剂样品中的维生素B​​：甲醇/氯化铵溶液超声提取30分钟
3. ​​烟酸​​：水提取后经阳离子交换固相萃取小柱净化
4. ​​叶酸​​：碱性溶液（含碳酸钠）超声提取30分钟

6. 色谱条件

• 色谱柱：C18柱（250mm×4.6mm，5μm）
• 流动相：含庚烷磺酸钠、EDTA二钠和三乙胺的特定pH溶液（pH3.70）与甲醇混合
• 流速：1.0 mL/min
• 柱温：30℃
• 检测波长：275nm（或各维生素最大吸收波长）
• 进样量：10μL

标准溶液色谱图示例：

7. 结果计算与精密度

• 采用外标法定量，标准曲线相关系数≥0.99
• 计算公式分多点校准和单点校准两种形式
• 精密度要求：重复测定结果的绝对差值≤算术平均值的10%

8. 注意事项

1. 所有操作需避光进行
2. 不同维生素需采用不同的提取方法
3. 含吸附剂的样品需特殊处理
4. 标准溶液需临用现配
5. 超出线性范围需适当稀释

9. 附录内容

• 附录A规定了不同含量范围的参考称样量
• 附录B提供了各维生素标准溶液的典型色谱图，包括：
  
  
  

该标准由多个专业机构共同起草，为宠物饲料中水溶性维生素的检测提供了科学、规范的方法，有助于保障宠物饲料质量和安全。