T/CNHIA 20-2025 马冷冻精液生产技术规程

​​《马冷冻精液生产技术规程》（T/CNHIA 202025）主要内容总结​​

​​1. 范围​​

• 规定了马冷冻精液生产的技术要求，包括实验室准备、采精、精液检查与处理、冷冻、检测、包装、贮存及运输。
• 适用于马冷冻精液的生产。

​​2. 规范性引用文件​​

• 引用GB/T 5458（液氮生物容器）和T/CNHIA 19（马人工授精技术规程）。

​​3. 术语和定义​​

• ​​稀释液​​：保护精子、延长存活时间及增加精液容量的液体。
• ​​种公马​​：需符合品种标准、健康无遗传疾病，并持有种公马证书。

​​4. 实验室准备​​

• ​​耗材与器械消毒​​：
  • 一次性耗材需38℃恒温干燥备用。
  • 采精筒（假阴道）用75%酒精消毒；玻璃/金属器械需高温烘干（150℃）。
• ​​仪器设置​​：恒温水浴锅（38℃）、显微镜载物板（38℃）。
• ​​稀释液配制​​：参见附录A（含葡萄糖、果糖、卵黄等成分）。
• ​​实验室消毒​​：紫外线消毒45分钟。

​​5. 采精​​

• 按T/CNHIA 19标准操作，确保无菌环境。

​​6. 精液品质检查​​

• 依据T/CNHIA 19进行活力、密度等检测。

​​7. 精液处理​​

• ​​离心​​：600g~800g离心10分钟，去除杂质。
• ​​密度测定​​：使用精液密度仪计算稀释液总量。
• ​​稀释​​：
  • 分两阶段（第一稀释液34℃等温稀释，第二稀释液4℃平衡）。
  • 避免剧烈震荡，分装至细管后编号（附录B）。

​​8. 精液冷冻​​

• ​​冷冻程序​​：
  • 全自动冷冻仪从4℃降至-35℃（5℃/min），再速降至-196℃（60℃/min）。
• ​​液氮罐​​：符合GB/T 5458标准，冷冻后按编号保存。

​​9. 冻精检测​​

• ​​解冻​​：38℃~40℃水浴快速解冻。
• ​​质量要求​​：
  • 解冻后活力≥0.4，畸形率≤20%，顶体完整率≥80%。
  • 不合格者废弃，每批次检测备案。

​​10. 包装​​

• 在-140℃以下环境操作，同批次同马冻精集中包装。

​​11. 贮存​​

• 液氮罐专人管理，每日检查液氮量。
• 冻精始终浸入液氮，转移时暴露时间≤3秒。
• 液氮罐每年清洗一次，避免拖行或碰撞。

​​12. 运输​​

• 专人专车运输，确保液氮罐稳定，冻精浸没液氮中。

​​附录A（稀释液配制）​​

• ​​第一稀释液​​：含葡萄糖、果糖、卵黄、M199、抗生素等。
• ​​第二稀释液​​：第一稀释液+5%甘油。
• 强调无菌操作（如卵黄取自无疫病鸡蛋，酒精消毒蛋壳）。

​​附录B（细管编号规则）​​

• ​​四部分编码​​：公司代号（4位）、品种代号（2~4位）、生产日期（6位，YYMMDD）、公马护照号（9位）。
• ​​示例​​：WLZM CKY 220608 09176996D（万良走马养殖场-岔口驿马-2022年6月8日-公马ID）。

​​核心要点​​

• ​​严格无菌操作​​：从采精到贮存全程消毒。
• ​​精准温控​​：稀释、冷冻、解冻均需特定温度曲线。
• ​​质量控制​​：解冻后活力≥0.4，畸形率≤20%。
• ​​可追溯性​​：细管编号确保批次与公马信息关联。
• ​​安全贮存运输​​：液氮环境管理是关键。

该标准系统规范了马冻精生产全流程，注重细节（如离心转速随马龄调整）、科学性强（分阶段稀释），并强调数据记录与质量把控。