T/CITS 257-2025 微生物快速鉴定 质谱法

​​T/CITS 257-2025《微生物快速鉴定质谱法》主要内容总结​​

​​1. 范围​​

• 适用于公共卫生、临床检验、食品检测、环境检测等领域，利用质谱技术（如MALDI-TOF MS）快速鉴定微生物。
• 涵盖仪器试剂、试验流程、结果报告、质量控制、安全操作及数据库更新等要求。

​​2. 规范性引用文件​​

• 引用GB 4789.10（金黄色葡萄球菌检验）、GB/T 6682（实验室用水）、GB 19489（实验室生物安全）等标准，确保方法合规性。

​​3. 术语和定义​​

• ​​质谱法（MS）​​：通过测定离子质荷比（m/z）进行定性/定量分析的技术。
• 其他关键术语如微生物培养时间、前处理方法等。

​​4. 仪器与试剂​​

• ​​必备设备​​：MALDI-TOF MS质谱仪、离心机、恒温培养箱、生物安全柜等。
• ​​关键试剂​​：甲酸、乙腈、乙醇、标准培养基（如血琼脂、沙氏琼脂）、标准菌株（如ATCC 8739大肠埃希菌）。
• 试剂纯度要求：色谱纯试剂和一级水。

​​5. 试验要求​​

• ​​菌株准备​​：
  • 需新鲜培养，不同微生物培养时间差异大（细菌18h~24h，丝状真菌2d~25d）。
  • 冻存菌株需传代2次后使用。
• ​​前处理方法​​：
  • 细菌/酵母：直接涂抹法或甲酸提取法。
  • 丝状真菌/分枝杆菌：需乙醇灭活、硅珠破壁等复杂处理。
• ​​靶点点样​​：
  • 菌量需均匀适度，避免污染；干燥后48h内检测（分枝杆菌需4h内）。
• ​​试验流程​​：
  • 定标校准（使用ATCC标准菌株或BTS）。
  • 靶板干燥后载入，设定激光能量等参数获取图谱。

​​6. 结果报告​​

• ​​结果类型​​：高置信度结果、多个相似结果、无结果。
• ​​报告原则​​：
  • 结合形态学、培养特征审核，鉴定到属/种/亚种水平并标注置信度。
  • 附录A详细说明不同MS系统的判读方式（如分值≥2.0且一致性A可直接报告）。

​​7. 质量控制​​

• ​​人员培训​​：每6个月一次，考核操作一致性。
• ​​仪器验证​​：新系统需全面验证（参考WS/T 807）。
• ​​日常质控​​：
  • 每批次检测前校准仪器。
  • 阴阳性对照（如ATCC标准菌株）每日记录，失控时暂停检测并排查原因。
• ​​室间比对​​：定期参加质评或实验室间比对。

​​8. 操作安全​​

• 遵循GB 19489生物安全要求，高致病性病原体需灭活后检测。
• 化学试剂使用需佩戴防护装备（口罩、手套等）。

​​9. 数据库更新​​

• 定期扩展数据库以提升鉴定覆盖率和准确性。
• 未涵盖的微生物可自建数据库。

​​附录A（资料性）​​

• ​​结果判读示例​​：
  • 分值≥2.0且一致性A：直接报告。
  • 低分值/混合结果：需补充实验或重新分纯。
  • 无结果：检查样本制备或仪器参数。
• ​​常见问题处理​​：如涂菌过厚、基质浓度不足、靶板污染等。

​​参考文献​​

• 引用GB/T 33682、YY/T 1740.2等标准及国内专家共识，支持方法科学性。

​​核心要点​​

• ​​技术核心​​：MALDI-TOF MS快速鉴定微生物，需严格前处理和质量控制。
• ​​关键流程​​：菌株培养→前处理→靶点点样→质谱检测→结果审核。
• ​​质控重点​​：人员能力、仪器校准、日常阴阳性对照。
• ​​安全与扩展​​：生物安全防护+数据库动态更新。

该标准为微生物质谱鉴定提供了标准化操作框架，确保结果准确、可靠且可追溯。