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T/YNX 002-2025 葡萄组培脱毒快繁技术规程
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- 类 别：团体标准规范
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资料介绍
以下是《葡萄组培脱毒快繁技术规程》（T/YNX 002-2025）的详细内容总结：
一、范围
适用于葡萄苗木的组培快繁技术，涵盖术语定义、设施设备、培养基制备、组培脱毒程序、移栽及出圃等全流程技术要求。
二、规范性引用文件
- NY/T 2377《葡萄病毒检测技术规范》
- NY/T 2378-2013《葡萄苗木脱毒技术规范》
三、核心术语定义
- 植物组织培养：无菌条件下离体培养植物材料成完整植株的技术。
- 外植体：用于组培的离体器官、组织或细胞（如茎尖、叶片等）。
- 初代培养：外植体首次诱导分化的过程。
- 继代培养：转接扩繁试管苗的过程。
- 葡萄微茎尖培养脱毒：利用茎尖分生组织（0.3~0.5mm）培养无病毒植株的技术。
- 葡萄脱毒组培苗：经脱毒检测合格的试管苗繁育的种苗。
四、组培设施与设备
- 功能分区：
- 化学实验室（配药、灭菌）
- 接种室（无菌操作）
- 培养室（温度23~25℃、光照2000~3000Lx）
- 洗涤室、贮存室、温室等。
- 关键设备：
- 超净工作台、高压灭菌锅（121℃灭菌）、电子天平（精度0.001g）、pH计。
- 培养架（日光灯照明）、人工气候箱（变温处理）。
五、培养基制备
- 母液配制与保存：
- 分组配制：大量元素（10×）、微量元素（100×）、铁盐（100×）、有机物（50×）。
- 生长调节剂（如6-BA、IBA）单独配母液（附录B）。
- 母液4℃冷藏保存。
- 培养基配方（以1L为例）：
- MS基础 + 琼脂5.2g + 蔗糖20g，pH 5.6~6.0。
- 初代培养基：MS + 6-BA 0.1mg/L + IBA 0.2mg/L + KT 0.5mg/L。
- 继代/生根培养基：1/2MS + IBA 0.1~0.2mg/L。
- 灭菌与保存：
- 121℃高压灭菌20~30min，常温保存≤7天，2~4℃保存≤14天。
六、组培脱毒快繁程序
1. 外植体处理
- 采集：生长季选健壮无病枝条，剪带芽茎段（3~4节）。
- 消毒：
① 流水冲洗20min；
② 75%乙醇浸泡30s；
③ 0.1% HgCl₂处理8~10min；
④ 无菌水冲洗5~6遍。
2. 接种与培养
- 初代培养：单芽茎段接初代培养基，20~30天诱导出芽。
- 继代培养：芽长3~4片叶时转接，每4~6周扩繁1次。
- 培养条件：温度23~25℃、光照12~16h/d、湿度20~30%。
3. 脱毒关键技术
- 变温处理：组培苗在25℃→37℃梯度变温下处理30天。
- 微茎尖剥离：取0.3~0.5mm茎尖，接启动培养基（MS + 6-BA 0.2mg/L + IAA 0.4~0.5mg/L）。
- 病毒检测：苗高8~10cm时按NY/T 2377检测病毒，阴性者为脱毒苗。
七、组培苗移栽
- 炼苗：
- 开瓶炼苗7天，再开盖炼苗2~4天，逐步适应外界环境。
- 移栽操作：
- 基质：草炭土:蛭石=3:1，消毒后装营养钵。
- 清洗：彻底洗净根部培养基，修根至3~5cm。
- 定植：植入营养钵，浇透定根水。
- 管理要点：
- 0~15天：温度20~25℃、湿度85~90%、遮光（8000~10000Lx）。
- 15~30天：湿度降至50~60%，喷施平衡肥（N-P-K=20:20:20，稀释1000~2000倍）。
八、组培苗出圃
- 出圃标准：苗高8~10cm、3~4片健康新叶。
- 大田移栽：带基质定植，亩施有机肥5000~6000kg，浇足定根水。
附录核心内容
- 附录A（规范性）：MS培养基母液配方（表A.1）。
- 附录B（资料性）：生长调节剂母液配制方法（如6-BA用0.1mol/L HCl溶解）。
- 附录C（资料性）：组培室布局与设备配置要求（如超净台放置原则）。
总结：该规程系统规定了葡萄脱毒组培苗生产的全流程，突出茎尖脱毒技术和变温处理的核心作用，强调无菌操作、培养基精准配制及移栽环境控制，确保产出无病毒、高成活率的优质苗木。