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T/HTCMA 083-2022 河南道地药材 红花组织培养育苗技术规程
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资料介绍
以下是针对《T/HTCMA 083-2022 河南道地药材红花组织培养育苗技术规程》的详细内容总结:
一、标准核心内容
1. 适用范围
- 规定红花(Carthamus tinctorius L.)组织培养育苗的 术语定义、设施设备、组织培养流程、温室驯化 等技术要求。
- 适用于河南省道地药材红花的工厂化育苗。
2. 术语与定义
- 道地药材:具有地域特色、历史悠久、品质优良的中药材。
- 红花:菊科经济植物,学名 Carthamus tinctorius L.。
- 组织培养:在无菌条件下,利用红花幼嫩胚根等外植体再生植株的技术。
- 愈伤组织诱导培养:外植体初代无菌培养阶段。
- 诱导分化培养:愈伤组织转接至分化培养基形成幼苗的阶段。
二、设施设备要求
1. 组织培养功能区
| 功能区 | 设备配置 |
|---|---|
| 洗涤室 | 洗瓶机、水槽、收纳箱、量瓶架 |
| 灭菌室 | 高压蒸汽灭菌锅、紫外线灯、烘干箱、微孔过滤器 |
| 培养基配制室 | 万分之一电子天平、酸度计、微波炉、冰箱 |
| 缓冲室 | 衣帽柜、风淋装置 |
| 无菌接种室 | 超净工作台、酒精灯、器械消毒器 |
| 无菌培养室 | 培养架、紫外灯、臭氧发生器、温湿度控制器(23~25℃)、光照控制器(3000~5000 lx) |
2. 温室驯化设施
- 温湿度调节装置、光照控制器、灌溉设备、栽培床、穴盘。
三、组织培养技术流程
1. 外植体制备与灭菌
- 种子处理:
- 精选饱满种子,自来水浸泡24小时。
- 超净台内灭菌流程:75%乙醇消毒30秒 → 无菌水冲洗3~5次 → 0.1% HgCl₂消毒20分钟 → 无菌水冲洗3~5次。
- 外植体取材:取萌发后健壮胚根,截取0.5~1 cm芽段。
2. 培养基配置
- 基本要求:pH值5.8,蔗糖30 g/L,琼脂4 g/L。
- 三类培养基成分(详见附录A):
成分类型 愈伤组织诱导培养基 分化培养基 生根培养基 植物激素 NAA 0.5 mg/L + 6-BA 1.0 mg/L NAA 0.1 mg/L + 6-BA 3.0 mg/L NAA 0.02 mg/L + 6-BA 0.02 mg/L 活性炭 3000 mg/L 无 无 无机盐浓度 全量MS 全量MS 减半MS(如NH₄NO₃ 825 mg/L)
3. 培养流程
| 阶段 | 操作要点 |
|---|---|
| 愈伤组织诱导 | 每10 mL培养基接种1个芽段,培养3周(23~25℃、光照16 h/d、3000~5000 lx)。 |
| 愈伤组织分化 | 切取愈伤组织转接至分化培养基。 |
| 生根培养 | 分化苗转接至生根培养基,培养至根芽齐全(同光照温度条件)。 |
四、温室驯化技术
- 幼苗锻炼:
- 带瓶锻炼:瓶苗移入温室,日光锻炼5~7天(湿度75%~85%、遮光率40%、23~25℃)。
- 开瓶锻炼:开瓶3~5天,保持基质湿润。
- 移栽操作:
- 洗净根部培养基,农用杀菌剂浸泡处理。
- 定植于营养土穴盘,喷水保湿。
五、附录关键信息
表A.1 培养基成分表
| 成分 | 愈伤诱导培养基 (mg/L) | 分化培养基 (mg/L) | 生根培养基 (mg/L) |
|---|---|---|---|
| NH₄NO₃ | 1650 | 1650 | 825 |
| 6-BA | 1.0 | 3.0 | 0.02 |
| NAA | 0.5 | 0.1 | 0.02 |
| 活性炭 | 3000 | 0 | 0 |
| 蔗糖 | 30000 | 30000 | 30000 |
六、标准属性与归口
- 性质:推荐性团体标准(非强制)。
- 提出单位:河南省农业科学院中药材研究所。
- 归口单位:河南省中药材协会、河南省农学会中药材专业委员会。
- 知识产权:归属于河南省农业科学院中药材研究所,由其解释并组织实施。
总结:该标准系统规范了红花组织培养的全流程,从外植体灭菌、培养基配方、培养环境控制,到温室驯化移栽,均提供可操作的技术参数,适用于规模化生产优质红花种苗。
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