T/SXSL 15-2024 猪冷冻精液生产技术规范

IICS 65.020.30
CCS B43
团体标准
T/SXSL 15-2024
猪冷冻精液生产技术规范
Technical specifications for frozen boar semen production
2024-12-29 发布2025-01-29 实施
陕西省饲料协会发布
T/SXSL 15-2024
Ⅰ
前言
本文件按照GB/T 1.1－2020《标准化工作导则第1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由陕西省饲料协会提出并归口。
本文件起草单位：西北农林科技大学、陕西正能农牧科技有限责任公司、杨凌衍数生物科技有限公
司、山西荷澜育种有限公司、陕西省畜牧技术推广总站、陕西省畜牧产业试验示范中心、泾阳县畜牧产
业服务中心、铜川市新区动物卫生监督所、富平县畜牧发展中心。
本文件主要起草人：高磊、胡建宏、连星、李胜、李智、张毅、褚瑰燕、王佳伦、温飞、胡张涛、
杨公社、贾永宏、陈辉、张曼、杨晓茹、邱小为、白萍莉、席华明、吴强、郭洁、赵彩会。
本文件为首次发布。
本文件由西北农林科技大学负责解释。
单位：西北农林科技大学。
地址：陕西省咸阳市杨凌区邰城路3 号。
电话：15600913628
邮编：712100
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猪冷冻精液生产技术规范
1 范围
本文件规定了猪冷冻精液生产与保存的基本要求和技术要求，包括精液采集、品质检查、稀释、
分装、冷冻、冻后品质检查、包装、储存及运输过程等内容。
本文件适用于猪冷冻精液生产。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本文件的引用而成为本文件的条款。凡是注日期的引用文件，仅所注日期
的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本文件。
GB/T 25172-2020 猪常温精液生产与保存技术规范
GB 23238-2021 种猪常温精液
NY/T 2077-2011 种公猪站建设技术规范
DB41/T 2371-2022 猪冷冻精液生产技术规范
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1 种公猪（Breeding boars）
体型外貌和生产性能符合种用标准要求的公猪。
3.2 采精器（Semen collection instrument）
模拟母猪阴道环境条件的采精工具。由外壳、内胎、集精瓶、附件等组成。
3.3 采精（Semen collection）
用人工模拟且有自然交配感的工具，以获得公猪精液的方法。
3.4 采精量（Volume per ejaculate）
公猪一次采精时排出的精液量。
3.5 精子密度（Sperm concentration）
单位体积精液中的精子数。单位为：108 个/mL。
3.6 精子活力（Sperm motility）
在37 ℃环境下前进运动精子占总精子数的百分率。
3.7 畸形率（Malformation rate）
在37 ℃环境下畸形精子占总精子数的百分比。
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3.8 菌落总数（Aerobic plate count）
每剂量精液在一定条件下培养后观察到的微生物菌落总数。
3.9 细管（Straw）
用于分装精液的聚乙烯复合材料的塑料管。
3.10 冷冻精液（Frozen semen）
经超低温冷冻并可在液氮中（-196 ℃）长期保存的精液，简称冻精。
4 基本要求
4.1 种公猪
种公猪符合NY/T 2077-2011 要求。
4.2 原精液
原精液符合GB/T 25172-2020 要求。
4.3 操作环境
按NY/T 2077-2011 执行。
4.4 仪器与设备
仪器设备参照DB41/T 2371-2022 执行。
5 稀释液配制
5.1 基础液配制按附录A.1 执行。
5.2 I 液配制按附录A.2 执行。
5.3 II 液配制按附录A.3 执行。
5.4 解冻液配制按附录A.4 执行。
6 品质检测
原精液品质检测按照GB/T 25172-2020 执行。
7 精液冷冻
7.1 离心与稀释
按附录B 执行。
7.2 平衡
用I 液重悬精子后，将离心瓶置于盛有17 ℃、500 mL 蒸馏水中，经2.5 h～4 h 缓慢降温至4 ℃～
5 ℃，4 ℃平衡0.5 h～1 h。加入等体积II 液，混匀后灌装，4 ℃平衡0.5 h。
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7.3 冷冻
7.3.1 程序冷冻
按照DB41/T2371-2022 执行。
7.3.2 熏蒸冷冻
将液氮倒入深度50 cm 以上的冷冻箱预冷10 min 左右，保持冷冻支架上的细管在液氮面之上3 cm，
盖上冷冻箱盖子熏蒸10 min，然后将细管浸入液氮中冷冻。
8 冻精质检
冻精质量检测方法按GB 23238-2021 执行。
9 分装、储存
分装参照DB41/T 2371-2022 执行；
储存参照DB41/T 2371-2022 执行。
10 运输
符合DB41/T 2371-2022 要求。
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附录A
（规范性附录）
冻精生产相关稀释液配制
A.1 预稀释液
推荐使用猪精液常温保存商品稀释液，按说明书配制。
A.2 Ⅰ液（冷藏保护液）
主要成分：乳糖、蛋黄。
按照以下比例配制冷藏保护液：称量11 g 乳糖加入100 mL 纯水中，使用容量瓶定容，配制成11%
（w/v）的乳糖溶液。将25 mL 蛋黄加入到100 mL 乳糖溶液中，使蛋黄最终比例达到20%，使用磁力
搅拌器混匀，4 ℃ 3500×g 条件下离心30 min，抽取上清，为冷藏液，使用前置于恒温箱内17 ℃保
存。
按照NY/T 1234-2018 中5.2 的方法抽取蛋黄：鸡蛋使用前先用温水洗净，再用75%酒精棉球对蛋
壳表面进行消毒，待酒精挥发后用蛋清分离器取出完整的卵黄，然后用灭菌的注射器穿过卵黄膜抽取
卵黄；或者在鸡蛋腰正中线处敲开一裂纹，将鸡蛋一分两半，2 个蛋壳交替倾倒，除去蛋清，然后将
卵黄倒在灭菌纸（滤纸）上滚动，除去卵黄膜上残留的蛋清后用灭菌的注射器穿过卵黄膜抽取卵黄。
A.3 Ⅱ液（冷冻保护液）
主要成分：乳糖、蛋黄、OEP（Orvus ES Paste，主要成分为十二烷基磺酸钠）、甘油。
按照以下比例配制冷冻保护液：取89.5 mLⅠ液置于250 mL 烧杯中，用移液器抽取9 mL 甘油和
1.5 mL OEP 加至其中，混匀，为冷冻液，置4 ℃备用。
A.4 解冻液
推荐使用猪精液常温保存商品稀释液，按说明书配制。
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附录B
（规范性附录）
精液离心与稀释
B.1 精液离心
B.1.1 离心前应准确称量离心管净重（g），做好标记。
B.1.2 精液在17 ℃环境条件下800×g 离心10 min，弃上清，称重。
精子体积按式（B. 1）计算：
（�0 = �1 − �0 /1.04）…………………………（B. 1）
式中：
V0 ——浓缩后精子体积，单位为mL；
W1 ——离心瓶加精子重量，单位为g；
W0 ——离心瓶重量，单位为g；
1.04 ——浓缩后精液比重估计值。
B.2 稀释
B.2.1 采集鲜精后检测精子密度P0，稀释后精子密度P1=P0/稀释倍数。
B.2.2 稀释后精子17 ℃平衡，取体积为V17℃的精液样品离心，弃上清，加入V1 体积Ⅰ液，4 ℃平衡。
此时精子密度为P2。
B.2.3 平衡后按照精液:Ⅱ液=2:1 比例加入Ⅱ液，Ⅱ液体积为V2。此时精子密度为P3，即最终精子密
度P3= 2
3 P2。
B.2.4 精液冷冻前体积，即加入Ⅰ液和Ⅱ液后精液总体积V3=V0+V1+V2。
B.2.5 精子最终密度P3 由生产需求而定。P3 推荐精子密度为5 亿个/mL，即P2 为7.5 亿个/mL。
Ⅰ液、Ⅱ液的添加体积分别按式（B. 2. 1、B. 2. 2）计算：
�1 =
�17℃ × �1
�2
− �0………………………………（B. 2. 1）
�2 = 1
2 (�0 + �1)………………………………（B. 2. 2）
式中：
P1 ——鲜精稀释后的精子密度，单位为亿个/mL；
V17℃ ——17 ℃平衡后，取样至离心瓶中的样品体积，单位为mL；
P2 ——加入Ⅰ液后样品精子密度，由最终精子密度推算得出，单位为亿个/mL；
V0 ——浓缩后精子体积，单位为mL；
V1 ——加入Ⅰ液的体积，单位为mL；
V2 ——加入Ⅱ液的体积，单位为mL。
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